[發明專利]一種微膠囊化增殖培養制備酪酸菌菌粉的方法及其應用

有效

• 申請號: 201110083328.0
• 申請日: 2011-04-02
• 公開（公告）號: CN102199590A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發明（設計）人: 孫梅;匡群;陳秋紅;何義進;謝駿;施大林;張維娜;史濟筠;鄒益東
• 申請（專利權）人: 江蘇省蘇微微生物研究有限公司;中國水產科學研究院淡水漁業研究中心;宜興市天石飼料有限公司
• 主分類號: C12N11/04
• 分類號: C12N11/04;C12N11/10;C12N11/12;A23K1/16;C12R1/145
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種微膠囊化增殖培養制備酪酸菌菌粉的方法，其特征在于：

出發菌株為酪酸梭狀芽孢桿菌（Clostridium?butyricum）JSIM-MCB20040312,保藏號：CGMCC?No.1647；由酪酸菌種子活化、酪酸菌微膠囊化包埋、微膠囊顆粒增殖、活菌計數、和酪酸菌菌粉制備工序制得；

酪酸菌種子活化培養基由下述原料及重量配比組成：

酵母膏0.3%～0.5%，牛肉膏0.5%～2.0%，蛋白胨0.5%～2.0%，葡萄糖0.5%～1.0%，可溶性淀粉0.1%～0.2%，氯化鈉0.5%，乙酸鈉0.3%～0.5%，鹽酸半胱氨酸0.05%～0.1%，CaC0₃?0.3%，用去離子水配制，pH?6.0～7.5；

酪酸菌發酵培養基由下述原料及重量配比組成：

葡萄糖0.1%～1.0%，蛋白胨0.5%～2.0%，酵母膏0.1%～1.0%，NaC1?0.5%，乙酸鈉0.3%～0.5%，?CaC0₃?0.1%～0.7%，自來水配制，pH6.0～7.5；

?(1)菌種活化：

無菌開啟凍干保藏菌種CGMCC?No.1647，接入裝有活化培養基的試管，進行靜置厭氧培養，30～37℃培養18～24h，然后以體積比1%～10%的接種量轉接于新鮮活化培養基，30～37℃培養20～24h，鏡檢，超過90%菌體形成芽孢時，即成熟，反復活化2～3次，種子菌懸液以體積比1%～10%接種量接入裝有發酵培養基的三角瓶中，三角瓶裝液量為體積比80%～90%，30～37℃恒溫培養箱中靜置培養20～24h；

(2)酪酸菌微膠囊化包埋：

a．包埋劑的制備??

制備含有重量百分比濃度為2.0%～5.0%的海藻酸鈉，0.2%～0.5%的乳酸鈉，0～3.0%的明膠，再含有0.1%～1.0%的可溶性淀粉或0.1%～1.0%纖維素或0.1%～1.0%膨潤土三者之一，所使用的溶劑為去離子水，混合制得包埋劑微膠囊壁材；

b.?交聯劑的制備??

配制重量百分比濃度為2.0%～3.0%的氯化鈣去離子水溶液，滅菌待用；

c.?微膠囊顆粒的制備??

按體積比為菌液:?包埋劑=1:3～5配制成菌液與壁材的混合膠液，充分攪勻后，將混合膠液噴霧至磁力攪拌的已滅菌的濃度為2.0%～3.0%的氯化鈣去離子水溶液中，形成2～3mm的微膠囊，靜置固化12～24h，即得酪酸菌微膠囊顆粒，每mL?菌液可制得200-300粒2～3mm的微膠囊；

(3)微膠囊顆粒增殖：將酪酸菌微膠囊顆粒以其制備所需的混合膠液與酪酸菌發酵培養基體積比0.5%-5%接入酪酸菌發酵培養基中進行培養，在不通空氣的條件下，攪拌轉速0～80r/min，30～37℃增殖培養18～24h；

(4)增殖培養后的微膠囊顆粒內活菌數測定：0.2mol/L檸檬酸鈉溶液振蕩溶解微膠囊顆粒后，采用MPN法進行活菌計數；

(5)酪酸菌菌粉的制備：

將步驟(3)所得增殖培養液高速離心收集濕菌體，濕菌體與干淀粉以質量比1:2～10進行混合，在30～50℃下干燥20-24h，粉碎機粉碎，過0.9mm篩，獲得酪酸菌菌粉制劑，酪酸菌菌粉制劑的菌粉濃度不低于1.0×10¹¹個/克。

2.用權利要求1方法制備的酪酸菌菌粉的應用，其特征在于用作漁業養殖飼料的添加劑，在飼喂基礎日糧中添加1.0～1.5mg?·kg^-1的酪酸菌菌粉制劑。