[發明專利]高效液相色譜法測定復合維B+雙氯芬酸鈉片中維生素B12含量的方法

無效

• 申請號: 201110082370.0
• 申請日: 2011-03-31
• 公開（公告）號: CN102226795A
• 公開（公告）日: 2011-10-26
• 發明（設計）人: 艾建高;孫偉東
• 申請（專利權）人: 寧波雙偉制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/36;G01N30/60
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及藥物含量測定領域，具體涉及一種高效液相色譜法測定復合維B+雙氯芬酸鈉片中維生素B₁₂含量的方法。

背景技術

復合維B+雙氯芬酸鈉片產品為外貿出口品種，主要市場在非洲大陸尼日利亞等國家，在當地是一國際名牌產品，每年銷量5000萬片以上，價格上有強勁優勢。但由于該產品在國內外均沒有現成的法定檢驗標準，按照外國公司提供的內部標準檢驗只能檢出維生素B₁與維生素B₆及雙氯芬酸鈉的含量，維生素B₁₂的含量沒有方法檢測和做鑒別的要求。

由于沒有方法檢驗出復合維B+雙氯芬酸鈉片中維生素B₁₂的含量，本申請人曾發生過出口產品被尼日利亞國家海關扣封的事件。于是，本申請人痛定思痛，決定對該產品檢驗技術進行技術攻關，填補該標準上維生素B₁₂檢驗的空白。

本處方制劑最主要的難點是維生素B₁₂在處方中用量極少(50μg/510mg)，理論上僅有可能做色譜鑒別或者理化辨別。維生素B₁₂及其制劑在CP2005、BP2009、USP31中均收載有檢驗方法，但均是以單方和規格量較大形式建立的法定標準，且最小單元重量合理，便于檢驗上樣品純化處理，檢驗方法相對成熟。上述標準中的方法經過試驗結果不好，一是量小檢不出，如果加大稱樣量，樣品溶液非常難純化處理，不符合微量分析思維邏輯；二是雖然客服了操作方法純化處理好樣品溶液，但維生素B₁與維生素B₆及雙氯芬酸鈉有干擾峰出現，無法給維生素B₁定位和計算含量。試驗成功希望渺小。花高價請上級部門藥檢所和國外藥檢實驗機構做維生素B₁₂鑒別或含量，均檢測不出維生素B₁₂。

發明內容

本發明的目的在于，提出一種高效液相色譜法測定復合維B+雙氯芬酸鈉片中維生素B₁₂含量的方法，以準確可靠地測定復合維B+雙氯芬酸鈉片中維生素B₁₂的含量。

為了實現上述目的，本發明提出的高效液相色譜法測定復合維B+雙氯芬酸鈉片中維生素B₁₂含量的方法包括：

(1)在避光條件下往維生素B₁₂對照品中加流動相溶解制備對照品溶液：

(2)在避光條件下將復合維B+雙氯芬酸鈉片樣品除去包衣，研細后加入流動相并用超聲波溶解，搖勻后離心沉淀，取上清液，稱定重量，加熱煮沸后放冷，再滴加流動相至煮沸前的重量，搖勻，過濾，制得供試品溶液：

(3)色譜條件：

色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱；

以甲醇和0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液體積比為22∶78作為流動相，磷酸二氫鉀溶液的PH值為6.4；

柱溫為35℃；

檢測波長為361nm；

流速為1.0mL/min；

進樣量為20μL。

本發明方法對復合維B+雙氯芬酸鈉片中維生素B₁₂含量的測定結果準確、可靠，方法簡便、科學，試驗時間短，無干擾峰，分離度、拖尾因子、不對稱度均符合中國藥典求，檢測結果良好。

具體實施方式

1.儀器與試藥

采用LC-10ATvp日本島津高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測器，美國制造P/N(7725i)手動進樣器，浙江大學N-2000數據工作站，柱溫箱，電子天平為十萬分之一分析天平，DD80型超聲脫氣機，800型離心機。維生素B₁₂對照品從中國藥物生物制品檢定所購買(批號：100248-200802，供HPLC法含量測定，含量95.5％)，復合維B+雙氯芬酸鈉片樣品自產(批號為091011)，甲醇為一級色譜純(產地：天津四友精細化學品有限公司出品)，水為雙蒸餾水(自制)，其他試劑為分析級試劑。

2.色譜條件

色譜柱選用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，尺寸為4.60mm×250mm，填料為Hypersi1?ODS2，填料的粒徑為5μm。以甲醇和0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液體積比為22∶78作為流動相，用10％磷酸溶液或者2moL/L氫氧化鉀溶液把磷酸二氫鉀溶液的PH調為6.4，流動相使用前先用超聲脫氣機超聲脫氣處理30分鐘，以去除流動相中的氣泡，柱溫為35℃，紫外檢測器的檢測波長為361nm，流速為1.0mL/min，進樣量為20μL。