[發明專利]篩選結核桿菌抑制劑的細胞模型及篩選方法

有效

• 申請號: 201110079787.1
• 申請日: 2011-03-31
• 公開（公告）號: CN102719368A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 司書毅;林媛;李妍;王彥昶;蔣建東;肖春玲;洪斌;高娜娜
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12Q1/18;C12Q1/02;C12Q1/34;A61K31/5415;A61P31/06
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 程泳

1.一種細胞，其表達結核桿菌核糖體蛋白L12和L10，其中，L12的編碼基因與轉錄因子的轉錄激活結構域位于一個表達載體，L10的編碼基因與轉錄因子的DNA結合結構域位于另一個表達載體。

2.根據權利要求1所述的細胞，其滿足如下的(1)-(3)中的一項或者多項：

(1)所述細胞為酵母細胞；

(2)所述轉錄因子為GAL4；

(3)L12蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，L10蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

3.根據權利要求1所述的細胞，其中，L12蛋白的編碼基因的核苷酸序列序列如SEQ?ID?NO：3所示，L10蛋白的編碼基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

4.根據權利要求1所述的細胞，其中，所述細胞能夠在缺陷性培養基SD/-Trp-Leu-His-Ade上生長。

5.一種用于篩選結核桿菌L12蛋白和L10蛋白相互作用阻斷劑、抗結核桿菌藥物、或者治療和/或預防結核病的藥物的細胞模型，其包含權利要求1-4中任一項所述的細胞。

6.根據權利要求5所述的細胞模型，其還包含空白對照細胞和/或陰性對照細胞；優選地，所述空白對照細胞為不轉染有任何載體的空白酵母細胞，所述陰性對照細胞為染有兩個不同的表達載體的酵母細胞，兩個表達載體中各插入有不同的基因，該兩個不同的基因表達的蛋白能夠相互結合，并且表達的蛋白不是L12和L10；更優選地，所述細胞模型包含AH109(AD-L12+BD-L10)、AH109(AD-T+BD-53)以及AH109。

7.權利要求1-4中任一項所述的細胞或者權利要求5或6所述的細胞模型在篩選結核桿菌L12蛋白和L10蛋白相互作用阻斷劑、抗結核桿菌藥物、或者治療和/或預防結核病的藥物中，或者測定抗結核桿菌活性中的用途。

8.一種篩選結核桿菌L12蛋白和L10蛋白相互作用阻斷劑、抗結核桿菌藥物、或者治療和/或預防結核病的藥物的方法，或者測定抗結核桿菌活性的方法，包括下述步驟：

1)將權利要求1-4中任一項所述的細胞或者權利要求5或6所述的細胞模型接種并進行培養；

2)分別向步驟1)中培養的細胞中加入待測化合物或組合物，使化合物或組合物的終濃度為10μg/m，繼續進行培養12-36小時；

3)觀察細胞的生長情況，找出對模型細胞具有抑制作用的化合物或組合物，得到初篩陽性的化合物或組合物；

可選地，還包括下述步驟：

4)將初篩陽性的化合物或組合物進行β-半乳糖苷酶活性抑制檢測。

9.式I或式II所示的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備結核桿菌L12蛋白和L10蛋白相互作用阻斷劑、抗結核桿菌藥物、或者治療和/或預防結核病的藥物中的用途。

10.一種抑制結核桿菌的方法，包括使用有效量的式I或式II化合物或其藥學上可接受的鹽的步驟。