[發明專利]胰蛋白酶原-2化學發光免疫檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201110075512.0
• 申請日: 2011-03-28
• 公開（公告）號: CN102226808A
• 公開（公告）日: 2011-10-26
• 發明（設計）人: 陳智周;范飛舟;范振符;張昊巖
• 申請（專利權）人: 北京永瀚星港生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N21/76;G01N33/543;G01N33/574
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;李昆岐

1.一種胰蛋白酶原-2化學發光免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：1)胰蛋白酶原-2校準品；2)胰蛋白酶原-2抗體或鏈霉親和素包被的微孔板；3)當2)中為胰蛋白酶原-2抗體包被的微孔板時，為酶標記的胰蛋白酶原-2抗體，當2)中為鏈霉親和素包被的微孔板時，為酶標記的胰蛋白酶原-2抗體和生物素標記的胰蛋白酶原-2抗體；4)化學發光底物液；以及5)濃縮洗滌液。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，用于標記胰蛋白酶原-2抗體的標記物為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶或生物素。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物為1，2-二氧乙烷類衍生物、魯米諾及其衍生物、異魯米諾及其衍生物或氨基苯二酰肼類衍生物。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物為AMPPD、魯米諾或異魯米諾或氨基苯二酰肼。

5.根據權利要求1～4中任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述濃縮洗滌液為PBST或含Tween20的Tris-HCl緩沖液。

6.根據權利要求1～5中任意一項所述的試劑盒，其特征在于所述胰蛋白酶原-2抗體是單克隆抗體或多克隆抗體。

7.根據權利要求1～6中任意一項所述的試劑盒，所述胰蛋白酶原-2抗體來源于大鼠、小鼠、兔、山羊、綿羊、豚鼠、牛、驢、馬、雞或猴子。

8.一種制備權利要求1～7中任意一項所述試劑盒的方法，其包括以下步驟：1)配制胰蛋白酶原-2抗原校準品；2)以胰蛋白酶原-2抗體或鏈霉親和素包被微孔板；3)當2)中采用胰蛋白酶原-2抗體包被微孔板時，采用酶標記胰蛋白酶原-2抗體，當2)中采用鏈霉親和素包被微孔板時，采用酶標記胰蛋白酶原-2抗體并采用生物素標記胰蛋白酶原-2抗體；4)配制化學發光底物液；5)配制濃縮洗滌液；6)分裝所述胰蛋白酶原-2抗原校準品、酶和/或生物素標記的胰蛋白酶原-2抗體、化學發光底物液、濃縮洗滌液；以及7)組裝為成品。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于所述步驟2)包括以下步驟：

I)胰蛋白酶原-2抗體的準備；

II)包被

用0.01～5mol/L?pH值為7.0～11.0的碳酸鹽緩沖液與1～20μg/mL的胰蛋白酶原-2抗體配制成包被液，或者

配制基于1000mL包含10～90g?Na₂HPO₄·12H₂O、1～50g檸檬酸的溶液，所述溶液的pH值為3～10，然后將鏈霉親和素以1～20μg/mL的濃度溶解到所述溶液中，配制成包被液；

將上述包被液負載于微孔板上，包被的微孔板為48或96孔的微孔板條；

III)用生理鹽水洗滌上述微孔板；

IV)封閉

配制封閉液，基于1000mL所述封閉液包含0.01～5.0g?NaH₂PO₄·2H₂O、0.01～10g?Na₂HPO₄·12H₂O、1～40g牛血清白蛋白和0.1～10mL生物防腐劑，所述封閉液的pH值為7.0～10，然后將所得封閉液負載于上述洗滌后的微孔板上。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于所述步驟3)中，胰蛋白酶原-2抗體酶標記物為偶聯堿性磷酸酶或是辣根過氧化物酶，采用辣根過氧化物酶時，采用過碘酸鈉法進行標記，采用堿性磷酸酶時，采用戊二醛交聯法進行標記。

11.根據權利要求8～10中任意一項所述的方法，其特征在于所述步驟3)中，采用生物素標記胰蛋白酶原-2抗體的步驟為：①將胰蛋白酶原-2抗體在0.01～2.00mol/L?pH?5～10的硼酸緩沖液中透析4～24小時，透析完畢后取出抗體裝入玻璃瓶中；②稱生物素10μg～1000μg溶于有機溶劑中；③將步驟①中得到的溶液與步驟②中得到的溶液混合，室溫反應1～24小時，加入100μl0.5～5mol/L的氯化銨溶液。

12.根據權利要求11所述的方法，其中，所述有機溶劑為DMF、DMSO或其組合。