[發明專利]為了測定糖化胺的樣品前處理方法和糖化胺的測定方法

有效

• 申請號: 201110072029.7
• 申請日: 2002-10-09
• 公開（公告）號: CN102207508A
• 公開（公告）日: 2011-10-05
• 發明（設計）人: 米原聰;小森胤樹
• 申請（專利權）人: 愛科來株式會社
• 主分類號: G01N33/72
• 分類號: G01N33/72;G01N1/28
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王靈菇;白麗

本申請是申請日為2002年10月9日、優先權日為2001年10月11日、中國專利申請號為02820191.4、發明名稱為“為了測定糖化胺的樣品前處理方法和糖化胺的測定方法”的分案申請。

技術領域

本發明涉及為了測定糖化胺的樣品前處理方法和糖化胺的測定方法。

背景技術

以往，利用氧化還原反應測定樣品中的測定對象的量已廣泛實施，其也適用于生化分析、臨床檢查等中糖化胺(糖化蛋白質、糖化肽、糖化氨基酸等)的測定。

特別地，血液中的糖化蛋白質，特別是其中的紅細胞中的糖化血紅蛋白反映機體血糖值的過去的歷史，因此是糖尿病診斷、治療等中的重要指標。例如，如下所示，用前述氧化還原反應，測定這種紅細胞中的糖化蛋白質。

首先，將紅細胞溶血以制備樣品，將果糖基氨基酸氧化酶(以下稱為“FAOD”)加到此溶血樣品中，其作用于糖化蛋白質的糖化部分，從而通過氧化還原反應生成過氧化氫。此過氧化氫量對應于前述糖化蛋白質量。然后，將過氧化物酶(以下稱為“POD”)和通過氧化而顯色的還原劑加到此樣品中，從而以前述POD為催化劑在前述過氧化氫和前述還原劑之間發生氧化還原反應。通過前述反應使前述還原劑顯色，通過測定這種顯色而可以測定前述過氧化氫量，結果是，可以得知紅細胞中的糖化蛋白質量。

發明內容

但是，用這種氧化還原反應測定糖化蛋白質的方法有這樣的問題，例如，生成比對應于樣品中實際所含糖化蛋白質的過氧化氫更多的過氧化氫。而且，取決于患者，糖化蛋白質的測定值暫時急劇升高，從而無法進行可信的測定。因此，前述方法需要進一步提高測定精度。而且，不限于在用前述氧化還原反應的測定方法，例如，在用抗原抗體反應的糖化胺測定方法中也同樣需要提高測定精度。

因此，本發明的目的是提供用于測定糖化胺的樣品前處理方法，借此使糖化胺的高度可信的測定成為可能。

為了達成前述目的，本發明提供以糖化胺為測定對象的樣品的前處理方法，所述方法包括使FAOD作用于前述樣品中存在的除測定對象糖化胺以外的糖化氨基酸或糖化肽而分解之，以除去前述糖化氨基酸或糖化肽。

前述“FAOD”是一般名稱，其底物不限于糖化氨基酸，例如，其還作用于糖化肽。而且，在本發明中，“糖化肽”指FAOD起作用的長度的肽，例如，氨基酸殘基數在2-6范圍內的肽。因此，在本發明中，FAOD不起作用的長度的糖化肽和糖化蛋白質總稱為“糖化蛋白質”。這樣，作為測定對象的前述糖化胺，例如，包括糖化蛋白質、糖化肽和糖化氨基酸。

本發明的發明人進行了深入研究以提高測定精度，并最終發現以下的事實。即，在全血中，除本來存在測定對象糖化胺以外，還存在測定對象以外的游離糖化氨基酸和糖化肽，前述FAOD也對這種糖化氨基酸和糖化肽起作用。因此，如果如上述用FAOD進行糖化胺的測定，則不僅在測定對象糖化胺和FAOD之間發生氧化還原反應，而且在測定對象以外的糖化氨基酸、糖化肽和FAOD之間發生氧化還原反應，從而在表面上增加測定對象的測定值。而且，關于前述問題，即就同一患者的全血樣品而言，即使在完全相同的條件下通過前述測定方法進行測定，從患者采血時間不同時測定值也顯著變化，還發現了以下事實。即，這個問題是主要見于接受點滴等的患者的現象，作為點滴成分，例如，含有葡萄糖等糖類和各種氨基酸時，由這些外來成分形成糖化氨基酸，糖化氨基酸暫時增加，導致上述測定值變化。這種現象不僅存在于前述通過氧化還原反應的測定中，例如，在前述用抗原抗體反應的測定方法中也同樣出現。因此，本發明的發明人發現，即使全血樣品中存在正常的糖化氨基酸或糖化肽、暫時的外來糖化氨基酸或糖化肽等除測定對象以外的糖化物，如果如本發明那樣預先對樣品進行前處理，使分解用FAOD作用于除測定對象以外的糖化氨基酸、糖化肽，就可以抑制如前述的表面上的測定值升高。通過其可以提高測定精度，此外，例如，由于與是否接受點滴無關，采血可以在任何時間進行，因此可以減少患者的負擔。因此，這樣的樣品前處理方法，例如，如果應用于前述的糖化血紅蛋白的測定，則糖化血紅蛋白作為糖尿病診斷指標的可靠性得以提高，從而成為臨床醫療等領域中的有用方法。

其次，本發明提供通過使FAOD作用于樣品中的糖化胺，測定其氧化還原反應而測定糖化胺的量的方法，所述方法包括在前述氧化還原反應之前，預先用前述本發明的前處理方法處理前述樣品而分解前述樣品中存在的除糖化胺以外的糖化氨基酸或糖化肽，以除去前述糖化氨基酸或糖化肽。