[發明專利]兩個阿魏酸酯酶酶活檢測的新化合物及其制備方法

無效

• 申請號: 201110070779.0
• 申請日: 2011-03-23
• 公開（公告）號: CN102190586A
• 公開（公告）日: 2011-09-21
• 發明（設計）人: 吳中柳;張帥兵;裴小瓊;馬小鋒;邵華武
• 申請（專利權）人: 中國科學院成都生物研究所
• 主分類號: C07C205/43
• 分類號: C07C205/43;C07C201/12;C07H17/075;C07H1/00;C12Q1/44
• 代理公司: 成都賽恩斯知識產權代理事務所(普通合伙) 51212
• 代理人: 肖國華

技術領域

本發明屬于化學發明技術領域，具體涉及兩個阿魏酸酯酶酶活檢測的新化合物及其制備方法。

背景技術

阿魏酸酯酶(EC?3.11.73)能水解存在于植物細胞壁中的羥基肉桂酸類化合物、阿拉伯木聚糖與某些膠質之間的酯鍵，是半纖維素完全降解所需的關鍵酶之一。目前，研究者已在一些真菌和細菌中發現了多種阿魏酸酯酶。為了進一步挖掘自然界中的阿魏酸酯酶資源和改造阿魏酸酯酶的某些特性，設計阿魏酸酯酶的模擬底物并建立快速有效的酶活檢測手段是許多研究者感興趣的問題。阿魏酸酯酶有廣泛的底物譜，其底物主要是對甲氧基化或(和)羥基化的肉桂酸具有基團專一性。目前，阿魏酸甲酯、阿魏酸對硝基苯酚酯、對硝基苯酚-阿拉伯呋喃糖苷-阿魏酸酯以及2-氯-對硝基苯酚-阿拉伯呋喃糖苷-阿魏酸酯等底物已報道并用于阿魏酸酯酶酶活檢測。但是，用上述底物檢測阿魏酸酯酶酶活存在反應靈敏度低或檢測方法復雜等問題。

發明內容

為了克服現有阿魏酸酯酶酶活檢測方法的缺點，本發明提供兩個用于阿魏酸酯酶酶活檢測的化合物，及其合成方法和檢測阿魏酸酯酶酶活的方法。

本發明阿魏酸酯酶酶活檢測的化合物及其合成方法如下：

1.阿魏酸2-氯-對硝基苯酚酯(化合物A)

黃色化合物，其分子式為C₁₆H₁₂ClNO₇，化學名為(E)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-4-硝基-2-氯苯基-酯；結構式為：

該化合物的鑒定：

用¹H核磁共振的方法確定該化合物：¹H?NMR(CDCl₃，600MHz)δ8.39(d，1H，J＝2.7Hz)，8.21(dd，1H，J＝2.7Hz?and?J＝9.1Hz)，7.88(d，1H，J＝15.8Hz)，7.44(d，1H，J＝9.1Hz)，7.18(dd，1H，J＝1.7Hz?and?J＝8.1Hz)，7.11(d，1H，J＝1.7Hz)，6.97(d，1H，J＝8.1Hz)，6.50(d，1H，J＝15.8Hz)，3.97(s，3H).

該化合物的合成方法：

參考已報道的對阿魏酸對硝基苯酚酯的合成方法(Shyamala?Hegde，et?al.Single-step?synthesis?of?4-nitrophenyl?ferulate?for?spectrophotometric?assay?of?feruloyl?esterases.Anal.Biochem.387(2009)，128-129)，將過量的阿魏酸和2-氯-對硝基苯酚與吡啶(Pyr)，三乙胺(TEA)，DCC加入到二氧雜環乙烷中，室溫攪拌反映24小時或更長時間至2-氯-對硝基苯酚消耗完全，過濾反映混合物并回收過濾液。將過濾液蒸餾干燥后溶于乙酸乙酯并加入硅膠蒸餾干燥。用柱層析的方法純化阿魏酸2-氯-對硝基苯酚酯。反應中所用試劑均可在供應商處買到，通過一步反應獲得化合物A。

反應路徑為：

反映試劑及反映條件：1，3-二環己基碳化二亞胺(DCC)，吡啶(Pyr)，三乙胺(TEA)，室溫攪拌24小時，80％產率。以上所用化合物都可在供應商處買到，通過一步獲得化合物A。

2.7-羥基香豆素-阿拉伯呋喃糖苷-阿魏酸酯(化合物B)

淺黃色底物，分子式為C₂₄H₂₂O₁₀，化學名為(E)-3-(4-羥基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-(2S，3R，4R，5S)-3，4-二羥基-5-(二氫色滿-2-酮-7-氧基)四氫呋喃-2-甲基-酯。結構式為：

該化合物的鑒定：