[發明專利]一種快速測定細胞核內DNA含量的方法

無效

• 申請號: 201110068228.0
• 申請日: 2011-03-22
• 公開（公告）號: CN102181534A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 孫小蓉;黃么姑
• 申請（專利權）人: 武漢蘭丁醫學高科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12Q3/00
• 代理公司: 武漢帥丞知識產權代理有限公司 42220
• 代理人: 朱必武

技術領域

本發明屬于核苷酸檢測領域，尤其涉及一種快速測定細胞核內DNA含量的方法。

背景技術

當生物體細胞發生癌變時，細胞核內的DNA含量會增加。因此，可以根據細胞核內DNA含量是否顯著增加來判斷細胞是否發生癌變。生物體細胞核內DNA的測定大多是通過光學方法來測定的。一般方法是將染料或顯色劑與細胞核內DNA特異性相結合，在光照下測定細胞核內光密度。當細胞核內DNA含量增高時，DNA結合染料或顯色劑增多，其光學密度增高。利用這個原理，可以通過圖像分析測定細胞核內DNA的含量，來判斷細胞是否發生癌變。另外，臨床醫生在顯微鏡下檢查細胞時，除對細胞核進行觀察外，還要觀察細胞漿的顏色及大小。醫生通過觀測細胞核內染色體粗細、染色體排列以及細胞核與細胞漿的比值，來判斷細胞是否癌變以及細胞的分型和分類。當染色體深染，排列紊亂并且當細胞核與細胞漿的比例縮小時，就可判別出細胞出現了癌變的可能。

目前，醫學上用顯微鏡確診的腫瘤患者多為晚期腫瘤病人，然而對于早期的腫瘤患者卻很難發現，原因在于早期患者的腫瘤細胞核內DNA含量增加不顯著，因此很多早期的腫瘤患者錯過了最佳治療時期。另外，醫生的經驗也決定了醫生的診斷水平。正因為如此，使得不同的醫生在診斷上存在著一定差別。同時，每個樣本有較多的細胞，在顯微鏡下要觀察大量的視野才能看完一個玻片，在樣本量較大時容易產生視覺疲勞。

如何做到將細胞樣本處理后，既能測定細胞核內DNA含量，又能方便臨床醫生觀察細胞形態(細胞核及細胞漿)，從而在早期準確地診斷出患者的病情，這是一個長期未解決的難題。

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明的目的在于通過對傳統的人體細胞核內DNA含量測定技術進行改進，提供了一種快速測定細胞核內DNA含量的方法。

本發明的目的是這樣實現的：一種快速測定細胞核內DNA含量的方法，其特征在于：先對細胞核用Feulgen染色，然后再用EA50或伊紅染色細胞漿，經過兩次染色后，將玻片上的樣本用計算機圖像分析系統進行掃描，同時獲取灰度與彩色圖像并配準；根據細胞的形態特征，將視野下的細胞進行分類，從中選取正常的淋巴細胞作為計算DNA含量的標準細胞；選出每個視野中的上皮細胞，根據標準細胞的DNA含量計算出玻片上的每個上皮細胞的DNA含量，記錄其所在位置，并將細胞圖片保存。對同一區域視野提供灰度圖像與彩色圖像供計算機圖像分析系統分析，并提供彩色圖像供形態學觀測和醫生復查。

以上所述的灰度圖像是通過黑白攝像頭在波長590nm光照下的細胞核取圖。

另外，本發明還提供了如下技術方案：

一種同時獲取灰度圖像與彩色圖像的方法，其特征在于：采用黑白與彩色雙顯微鏡攝像頭進行同時控制取圖。

一種自動定位細胞的自動平臺控制方法，其特征在于：根據細胞在玻片上的坐標，定位出細胞所在的視野，并使平臺移動到該視野進行鏡下復合。

一種建立臨床可疑DNA含量病例數據庫的方法，其特征在于：將臨床上證實的可疑細胞圖像(包括細胞核和細胞漿)進行儲存及分析其特征，用于與被測細胞對比。

一種細胞DNA含量穩定與否的判定方法，其特征在于：根據淋巴細胞核DNA含量相對穩定，以淋巴細胞核DNA含量作為判斷的標準。

本發明涉及的測定細胞核內DNA含量的方法具有如下優點和顯著的進步：既能快速測定細胞核內DNA含量，又能方便臨床醫生觀察細胞形態(細胞核及細胞漿)，從而在早期準確地診斷出患者的病情。

附圖說明

圖1用黑白攝像頭在20倍顯微鏡下拍攝的灰度圖像，被框出的部分是被系統檢測有癌變可能的細胞。

圖2用彩色攝像頭在20倍顯微鏡下拍攝的彩色圖像，被框出的部分是被系統檢測有癌變可能的細胞。

圖3實施例1的方法經過圖像分析系統得出的報告。

具體實施方式

由于生物體內，上皮細胞的面積比淋巴細胞大，同時淋巴細胞的形狀較圓，而上皮細胞的形狀不確定。所以，本發明首先根據細胞的形狀特征，對視野下的細胞進行分類，將細胞分為三類：上皮細胞、淋巴細胞和其它細胞。而淋巴細胞核中的DNA含量相對穩定，所以在測定生物體細胞是否發生癌變時，可以以淋巴細胞核中DNA的含量作為基準。本發明通過圖像分析系統計算上皮細胞核DNA的含量，若上皮細胞核DNA的含量與淋巴細胞核DNA的含量的比值達到一定的閾值，則說明此細胞有癌變的可能。本系統可以自動的掃描整個玻片，采用彩色與黑白攝像頭進行同時取圖，通過分析圖像統計出可能發生癌變的細胞數量并定位出細胞所在的視野，醫生可以很方便地找到可能發生癌變的細胞所在的視野，對彩色圖像進行分析復查。