[發明專利]一種畜禽肉中己烯雌酚的檢測方法

無效

• 申請號: 201110067166.1
• 申請日: 2011-03-21
• 公開（公告）號: CN102147369A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 楊潔;張金萍;朱文杰;徐亞同
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 上海藍迪專利事務所 31215
• 代理人: 徐筱梅;張翔

技術領域

本發明涉及雌激素檢測技術領域，尤其涉及一種畜禽肉中己烯雌酚的顯微共焦拉曼光譜檢測方法。

背景技術

動物性食品存在于人們日常生活中，其安全性檢測非常重要。己烯雌酚(Diethylstilbestrol?，DES)是一種人工合成的非甾體雌激素，因其具有增加蛋自質沉積和減少脂肪沉積的作用而作為促生長劑廣泛應用于畜牧養殖業，后經研究發現DES殘留對生物體具有刺激性早熟及潛在的致畸致癌等危害，因此動物性食品中己烯雌酚的殘留檢測問題受到國內外的高度重視。2003年中華人民共和國農業部發布《2003年度動物性產品中獸藥殘留監控計劃》(農牧發[2003]6號)，對DES在動物性食品中要求不得檢出。從市場的調查結果可知，盡管大部分國家已經規定在飼料中禁止添加DES，然而受到強大經濟利益的驅使，濫用DES現象仍然存在，動物性食品中殘留的DES仍然威脅著食用者的健康，因此，必須建立方便有效的DES殘留檢測方法以確保動物性食品的安全。

現有的己烯雌酚殘留檢測方法主要有氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質譜聯機法(GC/MS)、液相色譜-質譜聯機法(LC/MS)、放射免疫法(RIA)和酶聯免疫吸附法(ELISA)。中華人民共和國國家標準《畜禽肉中己烯雌酚的測定》（GB/T?5009.108-2003）中采用高效液相色譜法方法，其敏度較高，重復性較好，定量精度較高，但容易受到雜質的干擾，需要用適宜的填料柱，容量小，流動相消耗大；農業部1163號公告-1-2009《動物性食品中己烯雌酚殘留檢測酶聯免疫吸附測定法》中酶聯免疫吸附法檢測限及穩定性均達到要求，但DES試劑盒主要依靠國外進口，價格偏高；氣相色譜-質譜法雖能獲得較低的檢測限，但與氣象色譜法一樣，都必須要進行繁瑣的衍生化處理；液相色譜-質譜聯機法靈敏度高，檢測限低，但價格昂貴，難以在國內基層檢測部門普及；放射免疫法由于抗原抗體的特異性反應，存在交叉反應、假陽性反應的結果，組織樣品處理較繁瑣、需要有同位素防護設備，對操作人員有一定的危害等。可知，己烯雌酚的常規化學分析方法都存在一些不足，例如操作步驟繁瑣、消耗化學藥品、需制備試樣等。

為更好的保證人們日常生活中動物性食品安全，有必要尋找一種快速簡便的己烯雌酚檢測方法。

目前，拉曼光譜技術已廣泛應用于石油化工、生物醫學、地質考占、刑事司法、寶石鑒定等領域。與常規化學分析技術相比，拉曼光譜技術具有無損、快速、環保、操作簡便、無需消耗化學試劑、所需樣品量少等特點，且可獲得樣品的物理化學及深層結構信息，此外對水等極性物質極其不敏感，使其在食品安全檢測方面具有良好的應用前景。拉曼光譜檢測技術在食品安全檢測中的關鍵技術主要有降低熒光背景影響、熱效應的消除、拉曼標準譜圖庫的建立和低成本便攜式拉曼光譜儀的開發等。國外應用拉曼光譜技術檢測了在糧食、蔬菜、水果中普遍使用的殺蟲劑和殺菌劑等，已取得一定進展，但己烯雌酚標準拉曼圖譜及應用拉曼光譜技術檢測動物性食品中己烯雌酚的方法在國內外都尚未見報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，采用顯微共聚焦拉曼光譜檢測技術，建立己烯雌酚的標準拉曼譜圖數據庫，而設計出一種快速簡便的檢測畜禽肉中己烯雌酚方法。

本發明的目的是這樣實現的：

一種畜禽肉中己烯雌酚的檢測方法，它包括以下具體步驟：

（1）測定己烯雌酚標準拉曼譜圖

將己烯雌酚標準品粉末用顯微共焦拉曼光譜檢測儀檢測，激光發射波長為785nm，激光輸出功率W為0＜W＜300mW，工作環境溫度為10～40℃，掃描參數積分時間（Integration）為0～120s，掃描次數平均值（Average）為1～10，濾波器平滑參數（Boxcar）為1，尋找最大信號，得到己烯雌酚標準拉曼譜圖；

（2）制備畜禽肉樣品提取液

將畜禽肉樣于絞肉器中攪成肉糜，稱取5.00～20.00g絞碎肉樣放入50mL具塞離心管中，加入10.00～40.00mL甲醇，在渦流混勻器上劇烈混合成勻漿，超聲萃取20min，置振蕩器中震蕩5min，于4500r/min離心10min，用尖嘴吸液管吸出上清液，殘渣再重復萃取一次，合并上清液至蒸發瓶中，置于水浴旋轉蒸發儀上蒸干，然后加入10.00～40.00mL正己烷和5.00～20.00mL乙腈，移至于漩渦振蕩器上震蕩1min，棄去上層正己烷相，取下層乙腈相過0.2μm有機膜，最后再水浴旋轉蒸發至近干，用乙腈0.50～2.00mL定容，于通風櫥中將提取液同點多次點樣至單凹載玻片上揮發至干，備用；