[發明專利]一種檢測牛瓜氨酸血癥有害基因的方法及其專用引物

無效

• 申請號: 201110065117.4
• 申請日: 2011-03-17
• 公開（公告）號: CN102181529A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 孫東曉;謝巖;張沅;張毅;楊鳴洲
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種檢測牛瓜氨酸血癥有害基因的方法及其專用引物。

背景技術

隨著人工授精和胚胎移植技術在奶牛育種中的應用，種質產品(個體、凍精、胚胎等)在世界范圍內廣泛流通，使得優秀公牛種質資源充分利用。但在獲得優秀生產性能的同時，往往會將遺傳疾病也進行擴散，尤其是常染色體隱性遺傳疾病。

常染色體單基因隱性遺傳病是由常染色體上的一對等位基因控制的，只有在該基因為隱性純合的基因型時，個體才會患病。而隱性有害基因攜帶個體表型正常，但是其一旦與攜帶者交配，就會有0.25的可能性出現患病個體，而且攜帶者個體即使與正常個體交配，也會有0.5的可能性將有害基因傳遞給后代。這種特點導致它傳播有害基因的幾率非常大。一旦種用個體為常染色體有害基因的攜帶者，并且有良好的生產性能，在盲目追求提高生產性能的目的下，廣泛利用其種用價值，就會導致有害基因的大面積擴散。

瓜氨酸血癥(citrullinemia，CN)最早由Harper等在澳大利亞荷斯坦牛群中發現的一種常染色體單基因隱性遺傳疾病。其分子遺傳學基礎是奶牛11號染色體(BTA11)上精氨酸合成酶(argininosuccinate?synthetase，ASS)基因編碼的第86個氨基酸密碼子發生無義突變(CGA→TGA)，終止信號提前出現，從而使成隱性純合個體ASS功能缺失(Dennis?J?A，Healy?P?J，Beaudet?A?L，et?al.Molecular?Definition?of?BovineArgininosuccinate?Synthetase?Deficiency.Proceedings?of?the?National?Academy?of?Sciences?of?the?United?Statesof?America，1989，86：7947-7951.)。ASS參與肝臟的尿素循環，尿素循環受阻導致氨代謝障礙，使得血液中瓜氨酸濃度升高，個體產生氨中毒的現象。隱性純合子犢牛一般在24小時內開始發病，出現精神沉郁、食欲下降、以頭頂墻等逐漸加重的神經癥狀，最后死亡。病理學研究發現患病個體大腦皮層受到不同程度的損傷，犢牛從出生到發病再到死亡的全過程不超過一周(Harper?P?A?W，Healy?P?J，Dennis?J?A.Animal?Model?of?Human?Disease-Citrullinemia(Argininosuccinate?Synthetase?Deficiency).American?Journal?of?Pathology，1989，135：1213-1215；Healy?P?J，Harper?P?A?W，Dennis?J?A.Bovine?Citrullinaemia-A?Clinical，Pathological，Biochemical?and?GeneticStudy.Australian?Veterinary?Journal?l，1990，67：255-258.)。澳大利亞科學家通過系譜分析發現幾乎所有CN患病犢牛都可以追溯到一個共同祖先-澳大利亞優秀種公牛Linmack?CrissKing，其致病基因來自它的父親Gray?View?Crisscross。Linmack?Criss?King公牛由于其女兒在乳脂率上的良好表現，其凍精在澳大利亞、新西蘭等英聯邦國家廣泛使用，產生很多攜帶者后代(Healy?PJ，Harper?P?A?W，Dennis?J?A.Bovine?Citrullinaemia-A?Clinical，Pathological，Biochemical?and?Genetic?Study.Australian?Veterinary?Journal?l，1990，67：255-258；Healy?P?J，Dennis?J?A.，Camilleri?L?M，et?al.Bovine?Citrullinaemia?Traced?to?the?Sire?of?Linmack?Kriss?King.Australian?VeterinaryJournal?l，1991，68：155.)。

目前對CN的分子檢測方法主要是PCR-RFLP，其主要內容是：1.圍繞突變位點設計上下游引物，進行分析片段的擴增。2.利用限制性內切酶AvaII消化擴增片段。3.將消化好的片段進行瓊脂糖電泳檢測分型。如果原擴增片段不被AvaII消化成更小的片段，說明存在著有害基因。PCR-RFLP方法雖比較準確實用，但仍存在一定的假陽性，需要重復驗證并結合系譜和測序結果進一步驗證。

發明內容

本發明的目的在于提供一種引物組合物。