[發(fā)明專利]一種DNA吸附材料及使用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110064559.7
• 申請日: 2011-03-17
• 公開（公告）號: CN102671620A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設計）人: 吳錦昌;周俊東;孟星君;胡群超
• 申請（專利權）人: 蘇州市立醫(yī)院
• 主分類號: B01J20/12
• 分類號: B01J20/12;B01J20/30;C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：本發(fā)明涉及一種DNA吸附材料及使用方法，具體是用酸處理過的坡縷石在酸性環(huán)境來吸附DNA；當溶液處于中性環(huán)境中時釋放吸附的DNA。

技術背景：

對生物樣品進行DNA分析的時，需要進行DNA提取、DNA純化、DNA擴增等。如何保證DNA的完整性、純度對于DNA的分析至關重要。

目前常用的DNA吸附材料有：(1)表面偶聯有二乙胺乙醇(DEAE)的親水性樹脂，該樹脂依靠表面DEAE所帶正電荷，吸附帶負電荷DNA。(2)磁珠；該吸附材料以磁珠為載體，依靠表面羧基化的表面來吸附DNA，而磁珠使得吸附的DNA易于分離出來。(3)其他的硅膠、玻璃等吸附材料也是依靠類似的原理進行DNA吸附。

但是上述這些材料表面親水性強，極易吸附蛋白，糖類，RNA等水容物，從而使這些吸附材料經幾次循環(huán)后吸附過多雜質，影響了表面吸附DNA的能力，同時雜質阻塞樹脂間隙，使液體流過柱子的速度明顯變慢，二是偶連基團與樹脂的偶聯并不十分穩(wěn)定，在一經使用后的液體環(huán)境中，容易逐步解離。

坡縷石是一種層鏈狀結構的含水富鎂鋁硅酸鹽黏土礦物，1862年因首次發(fā)現于蘇聯的烏拉克地區(qū)(坡縷高斯克)而得名。它因質地輕柔，具有較強的吸附性能，坡縷石的一般化學結構式為(Mg5)(Si8)O20(OH)2(OH24)4H2O。坡縷石的比表面積達372m2/g，遠遠高于活化氧化鋁、硅藻土、固體硅膠等常用的固體吸附劑。這是因為坡縷石晶形結構中有許多管狀貫穿通道，可吸附多種極性與非極性分子物質進入貫穿通道之中，具有很強的吸附力。目前坡縷石已經被廣泛用于吸附黃酒中的懸浮沉淀。

此外，坡縷石還具有很強的酸、堿和熱穩(wěn)定性。有試驗表明將坡縷石分別浸泡在100/的HCL和10％的NaOH溶液中，放置48小時后觀察，材料膨脹，但不溶解。將坡縷石分別置于丙酮、乙醚、四氯化碳、乙酸乙酯、汽油等有機溶劑中浸泡48小時，材料仍無變化。實驗表明，坡縷石對酸、堿、及有機溶劑皆有惰性，化學穩(wěn)定性好。將天然坡縷石置于800℃的高溫爐中灼燒4小時，材料無變化，仍具柔軟性。當溫度升至1000℃以上時，材料開始發(fā)硬，仍具白色。說明坡縷石具有很好的熱穩(wěn)定性。

上述性質表明一方面坡縷石良好的吸附性能可以用于DNA的吸附，另一方面也表明坡縷石作為一種吸附材料具有極強的穩(wěn)定性，可以反復循環(huán)使用。

本發(fā)明正是利用坡縷石的吸附能力從而達吸附DNA的目的。

發(fā)明內容：

本發(fā)明公開了一種新的DNA吸附材料及使用方法。該方法具體如下：天然的坡縷石礦產洗滌、烘干、粉碎后用3.0mol/L鹽酸處理3小時，將該粉末加入pH為3.0-4.0的DNA溶液中，振蕩、混勻后，坡縷石可吸附溶液中DNA；吸附后DNA的坡縷石加入pH為7.0-8.0的溶液中后可釋放DNA。

本發(fā)明通過以下途徑實現：

1、將坡縷石粉末用95％的乙醇溶液中浸泡48小時，浸泡后，材料不溶解，不開裂，分散性能增加；再將坡縷石粉末置于3.0mol/L鹽酸(或1.5mol/L硫酸)處理3小時，120攝氏度烘干。

2、將坡縷石粉末加入DNA溶液中，調節(jié)反應pH值，使pH值3.0-4.0，反應溫度為室溫。

3、振蕩30秒，讓DNA與坡縷石粉末相結合。

4、12000rpm離心5分鐘，棄上清。

5、加入pH為7.7-8.0水或低鹽溶液，振蕩15秒，DNA重新釋放到溶液中。

下面結合實施例對本發(fā)明進行進一步說明：

實施例1坡縷石的DNA吸附性能

取20mg坡縷石粉末加入1.5ml離心管中，加入1ml95％的乙醇溶液，振蕩混勻后浸泡48小時；浸泡后12000rpm離心，棄上清，常溫下涼干。涼干后再將坡縷石粉末置于3.0mol/L鹽酸(或1.5mol/L硫酸)處理3小時，120攝氏度烘干。

將處理后的坡縷石粉末加入含有200μl，含有1μgDNA溶液中(溶液pH值3.0-4.0)，旋渦振蕩30秒。12000rpm離心5分鐘，盡可能棄上清。再向沉淀中加入20μl?pH為7.1水或pH為7.8?0.1mol/L的Tris-HCl溶液，振蕩15秒后離心，取2μl上清進行電泳檢測。檢測結果表明(圖1)，在最終的溶液中能檢測到DNA，且回收率＞90％，而坡縷石與DNA溶液結合后一起的上清中沒有檢測到殘留的DNA，說明坡縷石對于DNA的吸附是較為完全的。

實施例2不同pH值對DNA吸附性能的影響