[發(fā)明專利]快速目視比色檢測三聚氰胺的試劑盒及檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110062369.1
• 申請日: 2011-03-15
• 公開（公告）號: CN102109469A
• 公開（公告）日: 2011-06-29
• 發(fā)明（設計）人: 高志賢;周青青;柳明;劉楠;寧保安;王紅勇
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

技術領域

本發(fā)明涉及一種基于未修飾納米金可視化檢測三聚氰胺的方法，特別涉及快速目視比色檢測三聚氰胺的試劑盒及檢測方法。

背景技術

自從2008年由三聚氰胺引發(fā)的一系列事件后，暴露了奶制品檢測技術的致命缺陷，導致了我國奶制品行業(yè)的誠信危機，使我國的奶制品安全檢測問題面臨著巨大的挑戰(zhàn)。

三聚氰胺是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化工原料，常用于制造三聚氰胺甲醛樹脂，是建筑業(yè)中常用的防火材料，廣泛應用于塑料、裝飾、涂料和造紙等行業(yè)。國際化學品安全規(guī)劃署和歐洲聯(lián)盟委員會合編的《國際化學品安全手冊》第三卷表明：長期或反復大量攝入三聚氰胺可能對腎與膀胱產(chǎn)生影響，導致產(chǎn)生結石。

由此可見，三聚氰胺是一種禁止用于食品及動物飼料的化學物質(zhì)，被國家衛(wèi)生部列入可能違法添加的非食用物質(zhì)的“黑名單”。但仍有不良商家非法添加到牛奶以及其它蛋白制品中，就因其含氮量較高(66％)，加入食品中可產(chǎn)生表觀蛋白質(zhì)含量虛高的假象。因此，設計一種快速、簡便的檢測方法能現(xiàn)場實時檢測奶制品中三聚氰胺，遏制人為添加，顯得尤為重要。

目前國內(nèi)外用于原料奶及奶制品中三聚氰胺檢測的常用方法有美國FDA方法(GC-MS和HPLC)以及國標法(GB/T22388-2008)中的高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)，這些方法雖然能夠實現(xiàn)三聚氰胺的精確檢測，但其需要精密儀器、復雜操作、檢測費用高；此外還包括表面增強拉曼光譜法(SERS)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等雖然相對快速簡便但其檢測時間長，費用較高。而且，以上方法都需要專業(yè)技術人員進行操作并且前處理復雜。有的檢測方法在大部分食品生產(chǎn)企業(yè)和普通消費者中難以普及。因此提高奶制品檢測技術的可行性、靈敏度和特異性成為研究的重點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種高效、可靠、低成本的快速目視比色檢測三聚氰胺的試劑盒。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種用快速目視比色檢測三聚氰胺的試劑盒檢測三聚氰胺的方法。

快速目視比色檢測三聚氰胺的試劑盒，所述試劑盒包括：

A、納米金溶液：粒徑為5～10nm；

B、100～300g/L的三氯乙酸水溶液；

C、3M?NaOH水溶液；

D、離心管：2mL和5mL；

E、過濾器：0.22μm；

F、塑料吸管；

G、三聚氰胺標準比色卡；

所述納米金溶液是用下述方法制成：量取100mL質(zhì)量分數(shù)為0.01％的氯金酸水溶液于容器中，加入1～4mL質(zhì)量分數(shù)為1％的檸檬酸三鈉水溶液，于室溫下磁力攪拌均勻后，加入2～4mL硼氫化鈉-檸檬酸三鈉混合水溶液，所述混合水溶液中硼氫化鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.075％，所述檸檬酸三鈉的質(zhì)量分數(shù)為1％，于室溫下，在轉速為200～300轉/分鐘的條件下攪拌20-40min，得到桔紅色的納米金溶液，加入1mL質(zhì)量分數(shù)為0.02％NaN₃水溶液，再用0.22μm過濾器過濾后4℃避光保存；

三聚氰胺標準比色卡是用下述方法制成：

(1)配制濃度分別為240mg/L、120mg/L、60mg/L、30mg/L、15mg/L、7.5mg/L、3mg/L、1mg/L和0mg/L的三聚氰胺-牛奶溶液：

(2)取步驟(1)的各個濃度的三聚氰胺-牛奶溶液2.0mL分別放入5mL離心管中，每個離心管中加入0.1～0.4mL?100-300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2～3min，先用濾紙過濾到另外的離心管中，用3M?NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8，再用0.22μm過濾器過濾，得提取液；

(3)將步驟(2)獲得的提取液各取0.15mL分別加入到0.3mL納米金溶液中，混合均勻，室溫顯色反應1min后用數(shù)碼相機記錄顯色結果，采集圖片后，用具有顏色梯度的圖片組成標準色塊，將標準色塊按照三聚氰胺濃度高低進行排列并在其下方標注相應的三聚氰胺濃度，制作成卡片。

快速檢測三聚氰胺的方法，包括如下步驟：

(1)準備權利要求1所述試劑盒；

(2)對被測液態(tài)奶樣品或被測奶粉樣品進行前處理

所述液態(tài)奶樣品前處理為：取2.0mL液態(tài)奶至5mL離心管中，加入0.1～0.4mL?100～300g/L的三氯乙酸水溶液，用手劇烈振蕩混勻，靜置2～3min，先用濾紙過濾到另一離心管中，用3M?NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值至7～8，再用0.22μm過濾器過濾，得提取液；