[發(fā)明專利]抗乙型肝炎病毒X蛋白多肽藥物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110061840.5
• 申請日: 2011-03-15
• 公開（公告）號: CN102675422A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張曉東;葉麗虹
• 申請（專利權(quán)）人: 天津托普泰克生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K38/10;A61K48/00;A61P1/16;A61P31/20
• 代理公司: 中原信達知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 楊青;樊衛(wèi)民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多肽藥物領(lǐng)域，具體涉及抗乙型肝炎病毒X蛋白的多肽和編碼此多肽的多核苷酸，以及它們的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

肝癌是導(dǎo)致病人死亡的惡性腫瘤之一，其惡性程度高，在我國肝癌死亡率僅次于胃癌，居我國惡性腫瘤死亡率第二位。據(jù)統(tǒng)計，我國每年新增肝癌人數(shù)30萬人，而每年肝癌死亡人數(shù)達11萬。乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)感染可導(dǎo)致肝炎、肝硬變和原發(fā)性肝癌的發(fā)生，在我國80％以上的肝癌患者為乙肝感染后肝癌，可稱之為乙肝后肝癌。?

HBV為長約3.2Kb的DNA病毒，其開放閱讀框表達乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎病毒多聚酶和乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)(或稱之為乙型肝炎病毒X蛋白，即HBx)，其中HBx是HBV?DNA復(fù)制所必須的因子。由于HBx是HBV?DNA復(fù)制所必須的因子，因此抑制HBx的功能，意味著可抑制HBV的感染，以及由此導(dǎo)致的肝炎和肝硬變。?

另外，HBx作為反式作用因子，促進肝癌的生長和增殖，稱之為癌蛋白。在分子水平、細胞水平和動物水平的研究也發(fā)現(xiàn)，HBx具有很強的促肝癌細胞增殖和遷移的作用。轉(zhuǎn)基因鼠實驗也證明HBx具有顯著的促進肝癌發(fā)生的作用。大量研究結(jié)果顯示，HBV感染的持續(xù)存在可導(dǎo)致慢性肝病，包括慢性肝炎、慢性肝炎反復(fù)發(fā)作引起的肝組織中纖維結(jié)締組織增生后發(fā)生的肝硬變，及大部分在肝硬變基礎(chǔ)上發(fā)生的肝癌。在慢性肝病(包括肝炎、肝硬變和肝癌)的發(fā)生發(fā)展過程中，?HBx發(fā)揮了重要的作用。因此，HBx是預(yù)防和治療肝病的重要靶點。?

目前，肝癌的治療以手術(shù)為主，輔以介入療法，而化療效果不理想。在臨床手術(shù)的肝癌組織中HBsAg和HBxAg的表達陽性檢出率高達80％甚至90％以上。因此，HBx作為肝癌發(fā)生發(fā)展的重要致病因子，而發(fā)現(xiàn)其特異性抑制劑，則具有重要的理論意義和實際臨床應(yīng)用價值。然而，由于目前HBx的三維構(gòu)象解析尚未完成，故難以通過HBx立體三維構(gòu)象設(shè)計其化學(xué)抑制劑。?

多肽片段可作為藥物，其在臨床上已廣為應(yīng)用。例如，胸腺肽(thymopeptide)是從小牛胸腺中提取的胸腺五肽，具有促進淋巴細胞轉(zhuǎn)化、增強巨噬細胞吞噬活性的作用，可用于治療多種免疫缺陷病。多肽藥物的特點是藥理作用明確，安全性高，并易于生產(chǎn)。但是，多肽藥物的發(fā)現(xiàn)難度大，其原因在于大部分的多肽片段在體內(nèi)的半衰期短，直接影響藥效學(xué)作用。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種具有抑制乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis?B?virus?X?protein，HBx)功能活性的多肽，其在分子水平、細胞水平和動物水平上具有抑制HBx的活性，因而能抑制乙型肝炎病毒感染所造成的肝炎，由肝炎反復(fù)發(fā)作引起的肝硬變，以及在肝硬變基礎(chǔ)上發(fā)生的肝癌。該多肽和它的肽模擬物，包括它們的功能片段和功能變體，以及編碼這些多肽、肽模擬物或它們的功能片段、功能變體的基因，可廣泛用于防治乙型肝炎感染后的肝病，包括肝炎、肝硬變和肝癌。?

一方面，本發(fā)明提供了分離的多肽或肽模擬物，其包含如SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列、或其功能片段或功能變體，所述多肽或肽模擬物具有抑制乙型肝炎病毒X蛋白的功能，并能抑制乙型肝炎病毒感染后的慢性肝病的發(fā)生和發(fā)展。所述乙肝病毒感染后的慢性肝病可以包括肝炎，由肝炎反復(fù)發(fā)作引起的肝硬變，以及在肝硬變基礎(chǔ)上發(fā)生?的肝癌。?

在本發(fā)明的一些具體實施例中，上述多肽或肽模擬物，其包含的氨基酸序列、其功能片段或功能變體可以具有與SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列至少70％，或者80％，或者90％，以及甚至更高的相同性。優(yōu)選地，這些多肽或肽模擬物包含如SEQ?ID?NOs：1-6中所示的任一種氨基酸序列。?

另一方面，本發(fā)明提供分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含編碼如SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列、其功能片段或功能變體的多核苷酸；或者是與包含編碼如SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列、其功能片段或功能變體的多核苷酸互補或嚴(yán)格雜交的多核苷酸。優(yōu)選地，這些多核苷酸為編碼SEQ?ID?NOs：1-6所示的氨基酸序列的多核苷酸，或者為與編碼SEQ?ID?NOs：1-6所示的氨基酸序列的多核苷酸互補或嚴(yán)格雜交的多核苷酸。?