[發(fā)明專利]一種支原體培養(yǎng)鑒定及藥敏檢測板及對C+孔結(jié)果進行真?zhèn)舞b別的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110059666.0
• 申請日: 2011-03-14
• 公開（公告）號: CN102676378A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 岳力群;楊會宣
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢菁華時間科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/18;C12R1/35
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明所涉及的是臨床醫(yī)學(xué)檢驗和體外診斷技術(shù)領(lǐng)域。具體的是一種藥敏試驗板，本藥敏試驗板是在普通藥敏試驗板的基礎(chǔ)上，增設(shè)了鑒別區(qū)，增加額外的鑒別試驗，可在進行支原體藥敏試驗的同時，對C⁺孔結(jié)果進行真?zhèn)舞b別。具體鑒別方法是通過在支原體藥敏試驗板的基礎(chǔ)上增加了培養(yǎng)結(jié)果性質(zhì)的鑒別區(qū)，鑒別區(qū)內(nèi)包被有非抗支原體類微生物的廣譜抗生素藥物，對陽性對照孔(C⁺孔)內(nèi)容易導(dǎo)致假陽性、假陰性的雜菌進行抑制生長或者直接滅活，從而達到對培養(yǎng)結(jié)果的鑒別效果，具體包被的藥物可以為：β-內(nèi)酰胺類藥物、磺胺類藥物、利福霉素類、萬古霉素和抗真菌類等藥物中的一種或幾種。?

背景技術(shù)

支原體(mycoplasma)是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，是一種不同與細菌和真菌的另一類微小病原體，大小一般在0.3～0.5um之間，是細胞外生存的最小微生物。從人體分離的16種支原體中，主要有5種對人有致病性，即肺炎支原體(M.pneumoniae，Mp)、解脲支原體(Ureaplasma?urealyticum，Uu)、人型支原體(M.homins，Mh)、生殖支原體(M.genitalium，Mg)、穿透支原體(M.penetrans，Mpe)及發(fā)酵支原體(M.fermentans，Mf)。?

其中肺炎支原體(MP)是社區(qū)獲得性肺炎的主要病原體，由它引起的肺炎稱為肺炎支原體肺炎，其感染分布于全世界。人類對MP普遍易感，尤其是兒童組為發(fā)病高峰。解脲脲原體(UU)、人型支原體(MH)和生殖支原體(MG)等是性傳播疾病的主要病原體，可引起非淋菌性尿道炎、男性前列腺炎、附睪炎、女性陰道炎、盆腔炎、宮頸炎等泌尿生殖道感染性疾病，是男女不孕、不育的主要病因。?

臨床上，病原微生物的分離培養(yǎng)鑒定是感染性疾病確診的“金標(biāo)準”，但由于經(jīng)典的液固雙相培養(yǎng)法對支原體的培養(yǎng)檢測繁瑣、耗時長(長達7～30天)，無法適用于臨床。近年單純的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)法大大地縮短了培養(yǎng)時間，使支原體的分離培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗成為了可能，但是假陽性與假陰性的問題限制了支原體液體分離培養(yǎng)基和支原體藥敏培養(yǎng)法在臨床上的應(yīng)用。?

支原體液體分離培養(yǎng)基對支原體培養(yǎng)鑒定的原理是：通過支原體在液體培養(yǎng)基中生長代謝而產(chǎn)酸或產(chǎn)堿，進而使培養(yǎng)基中的指示劑變色，從而判斷是否有支原體的生長。而支原體藥敏培養(yǎng)法是在支原體液體分離培養(yǎng)基培養(yǎng)支原體的基礎(chǔ)上，增加支原體對相關(guān)藥物的敏感性測試。也就是說，支原體的液體分離培養(yǎng)基和藥敏培養(yǎng)法，其最根本的原理是：微生物的代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)液的酸堿度(pH值)發(fā)生改變，并使其中的指示劑變色。?

可是代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)液的酸堿度(pH值)發(fā)生改變，并使其中的指示劑變色，卻不是支原體獨有的特性。某些雜菌(如葡萄球菌、白色念珠菌等)在生長代謝過程中，也可能產(chǎn)酸或產(chǎn)堿，也能使指示?劑變色。因此，通過顏色變化進行結(jié)果判斷的支原體液體分離培養(yǎng)法和藥敏培養(yǎng)法，雖然可通過指示劑變色來提示可能有支原體的生長，但有比較高的假陽性率；而市場上的某些品種，為了排除假陽性，設(shè)計為：液體混濁為排除條件。這又使某些有支原體生長，尤其是某些合并有支原體生長者，被人為否定，造成假陰性。因此假陽性和假陰性問題，是干擾支原體液體分離培養(yǎng)基和支原體藥敏培養(yǎng)法的結(jié)果判斷的最主要因素，也是限制其在臨床上應(yīng)用的主要原因。?

本發(fā)明是在普通藥敏試驗板的基礎(chǔ)上，增設(shè)鑒別區(qū)，增加額外的藥敏鑒別試驗，從而可以在進行支原體藥敏培養(yǎng)的同時，對C⁺孔結(jié)果進行真?zhèn)舞b別。?

由于支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，沒有細胞壁，因此對作用于細菌細胞壁的抗生素(如β-內(nèi)酰胺類藥物、萬古霉素)完全不敏感，對多粘霉素、利福霉素類、磺胺類藥物普遍耐藥；而大多數(shù)產(chǎn)酸或產(chǎn)堿的細菌(如葡萄球菌等)對這幾類藥物，卻具有較高的敏感性。因此可以用這幾類藥物進行額外的藥敏鑒別試驗，排除大多數(shù)產(chǎn)酸或產(chǎn)堿細菌所造成的假陽性與假陰性干擾。?

而抗真菌類藥物，例如唑類或烷基胺類藥物藥物，主要通過抑制真菌細胞色素酶P₄₅₀(CYP)14α-脫甲基化酶，或抑制鯊烯環(huán)氧化酶，從而導(dǎo)致麥角烯醇耗竭，使真菌細胞膜破裂和死亡，因此對真菌有高敏感性，而對支原體幾乎無作用。因此增加抗真菌藥物的藥敏鑒別試驗，可以排除真菌(尤其是白色念珠菌)所造成的假陽性與假陰性干擾。?