[發(fā)明專(zhuān)利]補(bǔ)體結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110059551.1
• 申請(qǐng)日: 2011-03-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102207500A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-10-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛開(kāi)榮;丁家波;蔣玉文;蔣穎;程君生;王楠;劉軼秋
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/535
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/535;G01N33/96
• 代理公司: 北京君智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11305
• 代理人: 鄭明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于補(bǔ)體結(jié)合的抗原抗體免疫學(xué)檢測(cè)方法，屬免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)背景

任何抗原抗體復(fù)合物具有激活、固定補(bǔ)體的特性，以此建立的補(bǔ)體參與的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，具有高度的特異性。而酶標(biāo)記的顯色系統(tǒng)可用于揭示抗原抗體反應(yīng)，具有極高的靈敏度，已廣泛應(yīng)用于特異性免疫學(xué)檢測(cè)。基于補(bǔ)體參與的補(bǔ)體結(jié)合(complementary?fixation，CF)試驗(yàn)和以酶標(biāo)記顯色系統(tǒng)作為指示系統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)技術(shù)已廣泛應(yīng)用與抗原抗體特異性反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)。

CF試驗(yàn)是用免疫溶血機(jī)制做指示系統(tǒng)，來(lái)檢測(cè)另一反應(yīng)系統(tǒng)的抗原與抗體特異性反應(yīng)的試驗(yàn)。早在1906年Wasermann就將其應(yīng)用于梅毒的診斷，即著名的華氏反應(yīng)。這一傳統(tǒng)的試驗(yàn)經(jīng)不斷改進(jìn)，除了用于傳染病診斷和流行病學(xué)調(diào)查以外，在一些自身抗體、腫瘤相關(guān)以原以及HLA的檢測(cè)和分析中也有應(yīng)用。

該試驗(yàn)中有5種成分參與反應(yīng)，分屬于3個(gè)系統(tǒng)：①反應(yīng)系統(tǒng)，即已知的抗原(或抗體)與待測(cè)的抗體(或抗原)；②補(bǔ)體系統(tǒng)；③指示系統(tǒng)，即綿羊紅血球與相應(yīng)抗血清(溶血素)，試驗(yàn)時(shí)常將其預(yù)先結(jié)合在一起，形成致敏紅細(xì)胞。反應(yīng)系統(tǒng)與指示系統(tǒng)爭(zhēng)奪補(bǔ)體系統(tǒng)，先加入反應(yīng)系統(tǒng)給其以?xún)?yōu)先結(jié)合補(bǔ)體的機(jī)會(huì)。如果反應(yīng)系統(tǒng)中存在待測(cè)的抗體(或抗原)，則抗原抗體發(fā)生反應(yīng)后可結(jié)合補(bǔ)體；再加入指示系統(tǒng)時(shí)，由于反應(yīng)液中已沒(méi)有游離的補(bǔ)體而不出現(xiàn)溶血，是為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽(yáng)性。如果反應(yīng)系統(tǒng)中不存在待檢的抗體(或抗原)，則在液體中仍有游離的補(bǔ)體存在，當(dāng)加入指示系統(tǒng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)溶血，是為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陰性。因此補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可用已知抗原來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗體，或用已知抗體來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗原。

CF試驗(yàn)是一種補(bǔ)體參與的傳統(tǒng)免疫學(xué)技術(shù)，人和動(dòng)物許多疫病的診斷采用此方法。CF試驗(yàn)主要應(yīng)用在以下幾方面：①傳染病診斷。包括病原性抗原及相應(yīng)抗體的檢測(cè)。②其他抗原的檢測(cè)。例如腫瘤相關(guān)抗原、血跡中的蛋白質(zhì)鑒定、HLA分型等。③自身抗體檢測(cè)。

CF試驗(yàn)方法的主要優(yōu)點(diǎn)有：①特異性強(qiáng)。出現(xiàn)交叉反應(yīng)的機(jī)率較小。②應(yīng)用面廣。可用于檢測(cè)多種類(lèi)型的抗原或抗體。

CF試驗(yàn)方法的主要缺點(diǎn)是技術(shù)操作繁鎖、難以標(biāo)準(zhǔn)化和靈敏度不高。

ELISA也已是一種廣泛使用的免疫學(xué)技術(shù)。該技術(shù)是用酶標(biāo)記物參與抗原或抗體的特異性免疫反應(yīng)，以酶底物顯色，通過(guò)顯色程度來(lái)揭示抗原抗體特異性反應(yīng)的程度。

ELISA廣泛用于檢測(cè)一切抗原、抗體及半抗原。已成為免疫檢測(cè)中的主要技術(shù)之一。

ELISA的主要優(yōu)點(diǎn)有：①具有高靈敏度和良好特異性。②操作簡(jiǎn)便，可實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)，試劑易于標(biāo)準(zhǔn)化。③應(yīng)用面廣。可用于檢測(cè)多種類(lèi)型的抗原或抗體。

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)與ELISA的主要不同在于：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)有補(bǔ)體參與，抗原抗體的特異性反應(yīng)程度通過(guò)有否剩余補(bǔ)體參與溶血系統(tǒng)反應(yīng)導(dǎo)致紅血球溶血而體現(xiàn)；ELISA無(wú)補(bǔ)體參與，指示系統(tǒng)是酶顯色系統(tǒng)，而不是溶血系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容

1.要解決的技術(shù)問(wèn)題

本發(fā)明是建立一種基于補(bǔ)體結(jié)合的檢測(cè)抗原抗體特異性反應(yīng)的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)——補(bǔ)體結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(CF-ELISA)技術(shù)。

本發(fā)明通過(guò)利用酶標(biāo)記抗補(bǔ)體單克隆抗體或多克隆抗體及酶顯色劑作為指示系統(tǒng)，來(lái)顯示是否存在有補(bǔ)體參與的抗原抗體特異性反應(yīng)，可用已知抗原來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗體，或用已知抗體來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗原。

本技術(shù)發(fā)明利用了CF試驗(yàn)和ELISA的優(yōu)點(diǎn)，達(dá)到建立一種高特異、高敏感、便于標(biāo)準(zhǔn)化和使用方便的新型免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的目的。

2.解決其技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案

包被抗原或抗體制備，及用抗原或抗體包被酶聯(lián)反應(yīng)板；陰性和陽(yáng)性血清標(biāo)準(zhǔn)品的制備；

補(bǔ)體和酶標(biāo)補(bǔ)體抗體的制備；試劑的配制(包括樣品稀釋液、底物液A、底物液B、終止液、20倍濃縮洗滌液)。

本發(fā)明詳細(xì)描述

1.試驗(yàn)所需組分及其制備

(1)CF-ELISA板的包被

本發(fā)明試驗(yàn)中所涉及的抗原和抗體有布魯氏菌、炭疽桿菌、鼻疽桿菌、鉤端螺旋體、牛結(jié)核分枝桿菌、副結(jié)核分枝桿菌、禽結(jié)核分枝桿菌、耶爾辛氏菌O:9等病原微生物及其感染動(dòng)物的血清。由以上病原菌按常規(guī)方法制備的包被用抗原，以上的感染動(dòng)物血清為包被用抗體。