[發明專利]一種基于青霉素結合蛋白的檢測β-內酰胺類抗生素的方法及專用試劑盒和試紙條

有效

• 申請號: 201110057523.6
• 申請日: 2011-03-10
• 公開（公告）號: CN102253216A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 沈建忠;江海洋;吳小平;徐飛;王戰輝;趙寧;楊麗麗;李向梅;李艷偉
• 申請（專利權）人: 北京維德維康生物技術有限公司;中國農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種用于檢測β-內酰胺類抗生素的受體試劑盒，包括：SEQ?ID?NO：1所示蛋白、酶標記的氨芐西林和標準品溶液，所述標準品為青霉素G。

2.根據權利要求1所述的受體試劑盒，其特征在于：所述受體試劑盒還包括底物顯色液、終止液、洗滌液、樣品稀釋液、包被緩沖液和封閉液；

底物顯色液由A液和B液組成，A液為2％(質量百分含量)過氧化脲的水溶液，B液為1％(質量百分含量)四甲基聯苯胺的水溶液；

終止液為0.2M的硫酸水溶液；

每1升所述洗滌液是按照如下方法配制得到的：將0.5ml吐溫20、5g疊氮化鈉和990ml磷酸鹽緩沖液混合，得到所述洗滌液；所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01M，pH值為7.4；

樣品稀釋液：0.1mol/L、pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液；

每1升包被緩沖液按照如下方法制備：將Na₂CO₃1.59g和NaHCO₃2.93g溶于1升水中，用水定容至1升，得到所述包被緩沖液；

每1升封閉液按照如下方法配制：將50mgBSA、1g疊氮化鈉、30g酪蛋白混合，用磷酸鹽緩沖液溶解并定容至1000ml，得到封閉液；其中，磷酸鹽緩沖液的濃度為0.02M，pH值為7.2。

3.根據權利要求1或2所述的受體試劑盒，其特征在于：所述酶標記的氨芐西林為HRP標記的氨芐西林；

所述標準品溶液為青霉素G濃度如下的溶液：8.1μg/L、2.7μg/L、0.9μg/L、0.3μg/L、0.1μg/L。

4.根據權利要求1-3中任一所述的受體試劑盒，其特征在于：所述β-內酰胺類抗生素為如下中的至少一種：青霉素G、氨芐西林、阿莫西林、苯唑西林、鄰氯西林、新青霉素III、雙氯西林、羧芐西林、甲氧西林、頭孢氨芐、頭孢唑啉、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻吩、頭孢羥氨芐、頭孢噻呋、頭孢喹肟。

5.一種檢測β-內酰胺類抗生素的膠體金試紙，包括樣品吸收墊、膠體金墊、反應膜和吸水墊，其依次連接；所述膠體金墊包被有膠體金標記的帶有HIS標簽的SEQ?IDNO：1所示蛋白；所述反應膜上含有檢測帶和質控帶，檢測帶位置包被有阿莫西林與載體蛋白的偶聯物，質控帶位置包被有鼠抗HIS標簽單克隆抗體。

6.根據權利要求5所述的膠體金試紙，其特征在于：所述β-內酰胺類抗生素為如下中的至少一種：青霉素G、氨芐西林、阿莫西林、苯唑西林、鄰氯西林、新青霉素III、雙氯西林、羧芐西林、甲氧西林、頭孢氨芐、頭孢唑啉、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢噻吩、頭孢羥氨芐、頭孢噻呋、頭孢喹肟。

7.根據權利要求5或6所述的膠體金試紙，其特征在于：所述載體蛋白為OVA。

8.一種檢測樣品中β-內酰胺類抗生素的方法，為如下I或II所示：

I、檢測樣品中β-內酰胺類抗生素的方法包括如下步驟：

1)將待測樣品進行前處理，得到待測樣本溶液；

2)用權利要求1-4中任一所述受體試劑盒對所述待測樣本溶液進行檢測；

所述待測樣品為牛奶：將牛奶用樣品稀釋液按1∶4稀釋，4℃、10000rpm離心，取上清液，作為待測樣本溶液；

所述待測樣品為奶粉：稱取1g奶粉，溶于5mL樣品稀釋液中，混合均勻，作為待測樣本溶液。

所述待測樣品為尿液：將尿液直接作為待測樣本溶液；

所述待測樣品為肌肉、魚、蝦或蛋：將待測樣品勻漿處理，得到均質樣品，將每5g均質樣品加入10mL乙腈水溶液中，上下顛倒震蕩10min，5000rpm離心10min，取上清，氮氣吹干，用1mL樣品稀釋液重懸，得到的溶液即為待測樣本溶液；乙腈水溶液中乙腈和水的體積比為9∶1；

所述待測樣品為蜂蜜：將每5g待測樣品加入15mL去離子水中，混合；將所述混合溶液用Oasis固相萃取柱進行純化，用甲醇洗脫，收集洗脫液，氮氣吹干，用1mL樣品稀釋液重懸，得到的溶液即為待測樣本溶液。

II、檢測樣品中β-內酰胺類抗生素的方法包括如下步驟：

1)將待測樣品進行前處理，得到待測樣本溶液；

2)用權利要求5-7中任一所述所述膠體金試紙對所述待測樣本溶液進行檢測；

所述樣品稀釋液為0.1mol/L、pH值為7.2的磷酸鹽緩沖液。