[發明專利]一種能提高機體免疫力的南極適冷微生物胞外多糖

有效

• 申請號: 201110054901.5
• 申請日: 2011-03-09
• 公開（公告）號: CN102174614A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 陳靠山;白云貴;張鵬英;陳國創;禹文茜
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C08B37/00;A61K31/736;A61P37/04;A23L1/30;C12R1/01
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 趙會祥

1.一種能提高機體免疫力的南極適冷微生物胞外多糖的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將菌種保藏號為CGMCC?NO.3433的南極適冷細菌(Pseudoaltermonas?sp.)S-5活化后，接種于Zobell?2216E液體培養基中，9℃培養24小時，按1wt％量接種于Zobell?2216E液體培養基擴大培養，得擴繁菌種；

(2)將步驟(1)制得的擴繁菌種按10wt％的接種量，接種于液體發酵罐中的發酵培養基，向發酵培養基中加入發酵培養基重量0.3％的滅菌豆油后，7-9℃有氧攪拌培養50-60h，攪拌速度160-170r/min，得液體發酵液；

(3)將步驟(2)制得的液體發酵液在12000r/min下離心15min，收集上清液；

(4)將步驟(3)制得的上清液在60℃條件下，旋轉蒸發濃縮至原體積的1/4，得濃縮液，然后向濃縮液中加入三倍體積的95％乙醇，過夜沉淀，離心，收集沉淀；

(5)將步驟(4)收集的沉淀用水溶解，加入1/3體積的seveage試劑脫去蛋白質，制得粗糖溶液；

(6)將步驟(5)制得的粗糖溶液通過大孔樹脂D-301R脫色后，再經過DEAE-Fast?Flow陰離子交換柱和Sephadex?G-75層析柱分離，制得純化的胞外多糖溶液；

(7)將步驟(6)制得的胞外多糖溶液經真空冷凍干燥后，制得適冷微生物胞外多糖純品。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中的Zobell?2216E液體培養基組分如下，均為重量百分數：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，葡萄糖2％，人工海水余量，pH7.0。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中的發酵培養基組分如下，均為重量百分數：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，葡萄糖2％，氯化鈉2％，人工海水余量，pH7.0。

4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)的攪拌培養前還包括向發酵培養基中加入發酵培養基重量0.3％的滅菌豆油。

5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中的離心條件為：12000r/min，15min。

6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中的濃縮條件為：60℃，旋轉蒸發；濃縮液為上清液體積的1/4。

7.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)的seveage試劑由氯仿和正丁醇按照體積比4∶1構成；seveage試劑的添加量為溶解液體積的1/3。

8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述人工海水為Instant?Ocean?ReefCrystals海水鹽配制。

9.權利要求1所述制備方法制得的能提高機體免疫力的南極適冷微生物胞外多糖，其分子量為39,7046Da，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖按照摩爾比4.8∶50.9∶44.3構成。

10.權利要求9所述能提高機體免疫力的南極適冷微生物胞外多糖在制備促進體外脾淋巴細胞的增殖、增強巨噬細胞的活性及提高機體免疫力藥物及保健品方面的應用。