[發(fā)明專利]一種洋水仙根尖染色體制片的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110054325.4
• 申請日: 2011-03-08
• 公開（公告）號: CN102183394A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫曉梅;陸秀君;楊宏光;崔文山;張麗杰;孫琪;佟瀟
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責(zé)任公司 21101
• 代理人: 張述學(xué)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種洋水仙根尖染色體制片的方法。

背景技術(shù)

洋水仙又名荷蘭水仙，是從歐洲引入我國的水仙新品種的統(tǒng)稱，為石蒜科水仙屬多年生草本植物。全世界約有40個原種，多數(shù)原產(chǎn)于地中海沿岸及歐洲中部。其花朵碩大，花莖挺拔，副花冠多變，花色和諧，是世界著名的球根花卉，在世界各地廣泛栽培和應(yīng)用。

染色體是基因的載體，染色體的數(shù)目、形態(tài)和結(jié)構(gòu)，決定著細(xì)胞減數(shù)分裂中染色體的配對行為；配對行為的正常與否，決定著植物大小孢子育性的高低。因此，染色體的結(jié)構(gòu)和行為支配著植物的生殖過程和繁育行為，研究染色體的數(shù)目、結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞學(xué)行為，對于了解植物的遺傳背景，進而進行有選擇的雜交育種具有重要的意義。

然而，水仙倍性復(fù)雜，染色體基數(shù)有7、10、11不等，除二倍體外，還有三倍體和四倍體等。水仙屬染色體數(shù)目變化范圍極大，2n從14-46均有存在，此外還有三倍體和非整倍體等的存在，有的水仙品種可育，有的則表現(xiàn)為高度不育。

綜上可見，如果能找到洋水仙根尖染色體制片的最佳技術(shù)方法，對于其細(xì)胞遺傳學(xué)的理論研究及育種實踐具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，找到一種操作簡單方便的洋水仙根尖染色體的制片方法，使獲得的染色體分散均勻，背景淺，易于觀察。得出的染色體數(shù)目準(zhǔn)確度高。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

A.取材：上午9-10時取生長旺盛的盆栽洋水仙白色新根1-1.5cm。

B.低溫預(yù)處理：將取下的根尖清洗干凈，放入濃度為1g/L的秋水仙堿溶液中，在0-5℃冷藏條件下預(yù)處理4h。

C.固定：將預(yù)處理后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，卡諾氏固定液(無水乙醇∶冰醋酸＝3∶1)固定20h。

D.解離：將固定后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，在1mol/L鹽酸60℃水浴中解離10min，用加入2-3滴1mol/L氫氧化鈉(NaOH)的500ml蒸餾水漂洗3次。

E.染色：將解離后的根尖置于載玻片上，取根尖前端1.5-2mm呈現(xiàn)出乳白色的根尖，用解剖刀將取下的根尖沿縱向切割成兩部分，用吸水紙吸干根尖周圍的水分，滴入1-2滴卡寶品紅染色劑，染色10min，然后用蒸餾水漂洗。

F.壓片：將材料重新移至載玻片上，吸干材料周圍水分，蓋上蓋玻片，再用拇指輕擠壓蓋玻片(不要使蓋玻片移動)，使組織成為一薄層，輕輕敲擊蓋玻片，使細(xì)胞分散。

G.鏡檢：將壓片置于Motic顯微鏡(德國麥克奧迪公司Motic系列)下觀察，選擇染色體分散、清晰的細(xì)胞進行顯微照相，以便進行核型分析。同時可用記號筆在載玻片和蓋玻片上分別做記號，以便再次觀察和照相。

本發(fā)明的積極效果是：提供了一種適宜洋水仙染色體制片的方法，該制片方法操作簡單方便，染色體分散均勻且背景較淺，染色體數(shù)目易計數(shù)，采用本方法制片得出的染色體數(shù)目準(zhǔn)確度高。

附圖說明

圖1是洋水仙‘嘹亮’(Fortissimo)的染色體鏡檢結(jié)果和顯微照相示意圖。

圖2是洋水仙‘阿克拉’(Arkle)的染色體鏡檢結(jié)果和顯微照相示意圖。

具體實施方式

實施例1

成功觀察并統(tǒng)計出了洋水仙‘嘹亮’(Fortissimo)的染色體數(shù)目。

具體實施方法如下：

A.取材：上午9-10時取生長旺盛的盆栽洋水仙‘嘹亮’(Fortissimo)根尖1-1.5cm。

B.低溫預(yù)處理：將取下的根尖清洗干凈，放入濃度為1g/L的秋水仙堿溶液中，在0-5℃冷藏條件下預(yù)處理4h。

C.固定：將預(yù)處理后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，采用卡諾氏固定液固定20h，卡諾氏固定液為無水乙醇∶冰醋酸＝3∶1。

D.解離：將固定后的新根用蒸餾水漂洗3次，吸干水分，在1mol/L鹽酸60℃水浴中解離10min，用加入2-3滴1mol/L氫氧化鈉(NaOH)的500ml蒸餾水漂洗3次。

E.染色：將解離后的根尖置于載玻片上，取根尖前端1.5-2mm呈現(xiàn)出乳白色的根尖，用解剖刀將取下的根尖沿縱向切割成兩部分，用吸水紙吸干根尖周圍的水分，滴入1-2滴卡寶品紅染色劑，染色10min，然后用蒸餾水漂洗。

F.壓片：將材料重新移至載玻片上，吸干材料周圍水分，蓋上蓋玻片，再用拇指輕擠壓蓋玻片(不要使蓋玻片移動)，使組織成為一薄層，輕輕敲擊蓋玻片，使細(xì)胞分散。