[發(fā)明專利]旋毛蟲Ts27基因、其編碼蛋白及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110053721.5
• 申請日: 2011-03-07
• 公開（公告）號: CN102181450A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 諸欣平;楊靜;楊雅平;秦佳佳
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N15/11;C07K14/435;C07K16/18;G01N33/577;G01N33/53;A61K38/17;A61K39/395
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 程泳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種旋毛蟲基因，具體涉及一種旋毛蟲Ts27基因、其編碼的蛋白，以及所述基因和蛋白的用途。

背景技術(shù)

旋毛形線蟲(Trichinella?spiralis，簡稱旋毛蟲)，可感染人及150多種動物，它所引起的旋毛蟲病是一種人畜共患寄生蟲病，呈全球性分布，嚴(yán)重地威脅了人類健康并對畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。旋毛蟲生活史簡述如下：當(dāng)人或動物宿主生食或半生食含旋毛蟲囊包的肉類(豬肉、狗肉等)，囊包內(nèi)幼蟲在胃液、腸液作用下逸出并在小腸內(nèi)發(fā)育為成蟲。雌、雄蟲交配后雌蟲產(chǎn)新生幼蟲。新生幼蟲侵入腸粘膜淋巴管或靜脈，隨淋巴和血循環(huán)到達宿主橫紋肌繼續(xù)發(fā)育。旋毛蟲的致病過程分為三期：侵入期、幼蟲移行及囊包形成期，即在該蟲生活史的每個環(huán)節(jié)均可使宿主致病。

旋毛蟲病臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，診斷較困難，給及時的治療造成一定難度，因此該病的免疫診斷及預(yù)防成為當(dāng)務(wù)之急。目前常用的旋毛蟲病的診斷方法有兩種：一種是病原學(xué)檢查即肌肉活組織檢查，從患者肌肉組織中查出旋毛蟲幼蟲是最準(zhǔn)確的診斷方法。但因受摘取肌肉組織部位局限性的影響，在發(fā)病早期和輕度感染者肌肉活檢陽性率不高。而且由于是有創(chuàng)檢查，病人很難接受此種檢查方法。第二種是血清學(xué)檢查，檢測IgG水平。用于檢測抗旋毛蟲抗體的血清學(xué)方法有間接血凝試驗(IHAT)、間接熒光抗體試驗(IFAT)、乳膠凝集試驗(LAT)、免疫酶染色試驗(IEST)、酶聯(lián)免疫印漬技術(shù)(ELIB)及ELISA等。其中ELISA因其具有經(jīng)濟、檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化、敏感性比較穩(wěn)定等優(yōu)點，現(xiàn)在是常規(guī)檢測旋毛蟲感染的血清學(xué)方法。目前在ELISA檢測中常用的抗原有肌幼蟲排泄-分泌(excretory-secretory，ES)抗原、不同蟲期蟲體抗原或重組蛋白如53kDa和人工合成的泰威糖(tyvelose，3，6-雙脫氧己糖)抗原等。但ES和蟲體抗原與并殖吸蟲、華支睪吸蟲、日本血吸蟲和囊尾蚴等存在交叉反應(yīng)，故特異性較差。而重組蛋白雖然能夠提高特異性，但其敏感性不高。

由于旋毛蟲病原體不能在體外大量傳代培養(yǎng)，限制了抗原的獲??；加之旋毛蟲抗原的復(fù)雜性、多樣性，造成目前尚無很好的高敏感度高特異性的抗原作為診斷候選抗原。

發(fā)明內(nèi)容

為了獲得更好的診斷候選抗原，發(fā)明人通過大量的實驗尋找并克隆了旋毛蟲抗原新基因Ts27基因，通過重組表達和純化獲得了Ts27基因的重組蛋白，進一步獲得了特異性抗體，并用實驗證明Ts27基因編碼蛋白具有良好的免疫原性和特異性。

本發(fā)明的一個方面涉及分離的多核苷酸分子，其含有選自以下的核苷酸序列：

a.SEQ?ID?NO：1所示序列或SEQ?ID?NO：1所示序列中的編碼序列；

b.與a的核苷酸序列編碼相同序列的蛋白質(zhì)，但因遺傳密碼的簡并性而與a的核苷酸序列不同的序列；

c.在高等嚴(yán)緊條件下能夠與上述a或b的核苷酸序列雜交的核苷酸序列；

d、對上述a或b所示核苷酸序列進行一個或多個堿基的取代、缺失、添加修飾的核苷酸序列；

e、與上述a或b所示核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列；和

f.與上述a～e所示序列互補的序列。

在本發(fā)明的一個實施方案中，為SEQ?ID?NO：1所示序列或其編碼序列，即SEQ?ID?NO：1序列中第1位至第693位堿基所示的序列。

本發(fā)明的另一方面涉及分離的蛋白，其氨基酸序列由本發(fā)明的多核苷酸分子編碼。

在本發(fā)明的一個實施方案中，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發(fā)明的另一方面涉及含有本發(fā)明多核苷酸分子的重組載體，和含有所述重組載體的重組細胞。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述重組載體為將Ts27基因片段插入PET-28a(+)所獲得的載體。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述重組細胞為將本發(fā)明的重組載體轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21株所得到的細胞。

本發(fā)明的另一方面涉及抗體，其可特異性地結(jié)合本發(fā)明的蛋白，所述抗體可以為單克隆抗體或多克隆抗體。

所述單克隆或多克隆抗體可以通過本領(lǐng)域常規(guī)的免疫方法制備。例如可從被免疫動物的血清中得到和分離多克隆抗體，并使用常規(guī)方法試驗其對抗原的特異性?；蛘?，也可使用由培養(yǎng)的連續(xù)細胞系生產(chǎn)抗體分子的任何技術(shù)制備并分離單克隆抗體。

在本發(fā)明的一個實施方案中，將Ts27基因重組蛋白免疫小鼠，可以獲得高滴度的抗體血清，得到針對Ts27基因編碼蛋白的多克隆抗體。

本發(fā)明的另一方面涉及藥物組合物，其含有本發(fā)明的蛋白，或者本發(fā)明所述的抗體，以及藥學(xué)上可接受的載體。