[發(fā)明專利]地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1及其基因和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110053657.0
• 申請日: 2011-03-07
• 公開（公告）號: CN102199584A
• 公開（公告）日: 2011-09-28
• 發(fā)明（設計）人: 賴仞;楊海龍;王義鵬;肖瑤
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明動物研究所
• 主分類號: C12N9/48
• 分類號: C12N9/48;C12N15/57;A61K38/48;A61P7/02
• 代理公司: 昆明今威專利代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發(fā)明提供一種地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1及其基因和應用，屬于生物醫(yī)學技術領域。

背景技術：

隨著人們的生活水平不斷提高，生活節(jié)奏越來越快，繁忙的工作，不合理的飲食結構，不規(guī)律的生活作息，抽煙酗酒和缺乏體育運動等眾多誘因導致越來越多的人患有各種心血管疾病。世衛(wèi)組織指出，目前全球每年有1800萬人死于心臟病和其他心血管疾病，約占全球死亡人數的三分之一，預計到2020年這個數字將有可能突破2000萬。血栓栓塞性疾病嚴重影響人類的健康，是導致死亡率最高的病因之一。在過去的幾十年中，已經開發(fā)的抗栓藥物主要包括溶栓藥、抗凝藥和抗血小板藥。但是目前市面上的所有抗血栓藥物經常伴隨著低血壓、出血等系統(tǒng)性的副作用，因此，急需開發(fā)新型的安全抗血栓藥物。

在長期與自然條件做斗爭的社會生產實踐活動中，我國人民利用各種動物資源預防與治療各種疾病有著悠久的歷史，積累了豐富的藥用知識和經驗。《本草綱目》和其他地方醫(yī)藥典籍中記載有許多活血化瘀的藥方。中藥是祖國醫(yī)藥學的重要組成部分，其功效已為幾千年的歷史和現代臨床療效所肯定。地鱉蟲(Eupolyphaga?sinensis?Walker)，隸屬于節(jié)肢動物門蜚蠊目鱉蠊科，是一種重要的中藥材，具有破血逐瘀、續(xù)筋接骨的功效，已被我國各族人民廣泛使用一千多年。從傳統(tǒng)中藥中挖掘預防和治療血栓疾病的藥物先導分子，對于人類的健康是有著非常重要的意義。

發(fā)明內容：

本發(fā)明的目的在于提供一種地鱉蟲抗血栓酶及其基因和應用。

本發(fā)明的技術方案包括地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1的制備和氨基酸序列測定，地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1基因的克隆，Eupolytin1的體外重組表達和地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1的藥理實驗四部分內容。

地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1是我們首次從地鱉蟲消化道中腸中分離得到的一種活性蛋白質，分子量約24KDa。抗血栓酶Eupolytin1前體由254個氨基酸組成，其中1-28位氨基酸(斜體部分)為信號肽部分，第29-254位氨基酸為成熟的Eupolytin1蛋白，該前體全序列一級結構為(氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1)：IVGGSDANIEDLPYQLSFEYGGSHMCGASIIS??60

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地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1基因的克隆包括：地鱉蟲消化道中腸總RNA提取，mRNA純化，mRNA反轉錄及cDNA文庫構建，設計引物，利用PCR方法擴增編碼基因。基因測序結果表明地鱉蟲抗血栓酶Eupolytin1的編碼基因(GenBankaccession?Gu187070)由888個核苷酸組成，第85-765位核苷酸編碼成熟的Eupolytin1蛋白，該基因的5’端至3’端序列為(核苷酸序列為SEQ?ID?NO：2)：

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