[發明專利]三日型猴瘧動物模型及其建立方法

無效

• 申請號: 201110051134.2
• 申請日: 2011-03-03
• 公開（公告）號: CN102160534A
• 公開（公告）日: 2011-08-24
• 發明（設計）人: 黃亞銘;崔立旺;傅偉忠;韋海艷;林康明;毛瑋;區德錦;鄒春燕;謝莉萍
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區疾病預防控制中心
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61B19/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 翁建華

技術領域

本發明涉及在中國境內野生猴體內發現的一株豬尾猴瘧原蟲中國株H(Plasmoiuminui-China?Huang)即三日型猴瘧原蟲，并可通過人工飼養的按蚊傳染或直接血液傳染給健康猴，建立起非人靈長類瘧原蟲動物模型，尤其是一種三日型猴瘧動物模型及其建立方法。

背景技術

瘧疾仍然是目前世界上引起人類發病率和死亡率最高的疾病之一，據世界衛生組織的報道每年全球約有250-350萬人死于瘧疾的感染。我國每年大概發現有74萬多的瘧疾病人，并出現有惡性瘧病人對傳統抗瘧藥物產生抗性的病人，北方五省(蘇、魯、豫、皖、鄂)的瘧疾發病率出現回升并有局部的爆發點，因此，國內外均在加緊對瘧疾的研究。

在對瘧疾的研究過程中，非人靈長類動物是研究人類瘧原蟲十分重要的動物模型，而能將人類瘧原蟲感染給大猩猩及南美洲的夜猴(Aotus?monkey)的動物模型其數量稀少價格昂貴且不易獲得。因此，在過去100多年里各國科學家通過努力發現在世界范圍內廣泛分布的獼猴中尋找出多種猴瘧原蟲，通過生物學的觀察分類發現不同種類的猴瘧原蟲與人類不同種類的瘧原蟲不論是紅細胞內各期瘧原蟲形態和裂變周期，還是在蚊體內發育均具有著十分相似的生物學特征，為此各國均建立起了不同種類的猴瘧動物模型。盡管如此，從猴分離的瘧原蟲按人瘧原蟲的分類法分為惡性瘧型、間日型和三日型等，依據是紅細胞內期裂體增殖循環周期，而目前國內建立的猴瘧動物模型主要是從國外引進的間日型瘧原蟲，如中國醫學科學院建立的食蟹猴瘧原蟲屬于間日型猴瘧(張家塤等.一種猴瘧原蟲的鑒定報告.動物學報，1980，26：140.)，又如二軍醫建立的猴瘧模型(戴祖瑞等.食蟹猴瘧原蟲B株-斯氏按蚊-恒河猴猴瘧模型在國內的建立.中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志，1987，5(3)：197-198)，同樣屬于間日型猴瘧。因此，這給深入研究不同類型瘧疾及其免疫帶來了困難，也阻礙了針對性抗瘧藥物的開發進程。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種成本低廉、操作簡便、重現性好、易于保種的三日型猴瘧動物模型及其建立方法，為深入研究三日型瘧疾奠定了基礎，也為設計或篩選針對性抗瘧藥物提供了可靠依據。

為解決上述技術問題本發明采用如下技術方案：通過豬尾猴瘧原蟲CCTCC?NO.V201021感染健康猴或免疫缺陷猴。

三日型猴瘧動物模型的建立方法，該方法包括如下步驟：

<1>取豬尾猴瘧原蟲CCTCC?NO.V201021保種猴靜脈血輸血感染免疫缺陷猴；

<2>對步驟<1>被血傳感染的免疫缺陷猴進行飼養觀察，當采血鏡檢發現血內瘧原蟲配子體計數達64個/100WBC且雄雌配子體比例為1∶2時，從感染猴靜脈取血并抗凝而后給大劣按蚊雌蚊吸血感染；

<3>將步驟<2>吸血大劣按蚊雌蚊飼養觀察，當在解剖鏡下解剖發現吸血蚊唾液腺中出現成熟子孢子后，取感染蚊自然感染健康猴；

<4>按蚊感染健康猴后飼養觀察，當采血鏡檢監測發現紅細胞內有瘧原蟲即得。

步驟<3>中出現成熟子孢子的時間為大劣按蚊吸血感染后第11～13天。

三日型猴瘧動物模型的建立方法，該方法通過抽取帶有豬尾猴瘧原蟲CCTCCNO.V201021保種猴的感染血并抗凝后，經靜脈注入健康猴體內，感染3-5天后血檢健康猴發現血內有瘧原蟲即得。

三日型猴瘧動物模型的建立方法，該方法采用復蘇后的豬尾猴瘧原蟲CCTCCNO.V201021保種猴靜脈血，經靜脈注入健康猴體內，感染3-5天后血檢健康猴發現血內有瘧原蟲即得。

復蘇是取液氮凍存的豬尾猴瘧原蟲CCTCC?NO.V201021保種猴靜脈血冰凍管，放入36℃的水浴箱中，待10-15分鐘冰凍管回溫即可。

保種猴靜脈血的制備是從患病猴靜脈取血利用肝素抗凝后，采用無菌含30％甘油與抗凝血按1∶1比例混勻后，分裝入1.5毫升的冰凍管中，凍存于液氮罐中保種備用。

本發明采用的豬尾猴瘧原蟲系中國廣西境內發現的一株野外自然界的豬尾猴瘧原蟲，通過將其感染給人工飼養的中國海南島大劣按蚊(Anopheles?dirus)，再由按蚊傳染給健康猴，經生物學觀察和分子生物學試驗鑒定屬豬尾猴瘧原蟲種(Plasmoium?inui)即三日型猴瘧原蟲，并定名為豬尾猴瘧原蟲中國株H(Plasmodium?inui-China?Huang)。