[發明專利]慢性乙型肝炎肝纖維化的血清多肽標記物及其檢測方法

有效

• 申請號: 201110050133.6
• 申請日: 2011-03-02
• 公開（公告）號: CN102653552A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發明（設計）人: 陸倫根;徐銘益;王燕;曲穎;董育瑋;蔡曉波
• 申請（專利權）人: 上海交通大學附屬第一人民醫院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K14/00;G01N33/68
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬生物醫藥領域，涉及生物醫學中診斷肝纖維化血清分子標記物，具體涉及一類非創傷性診斷慢性乙型肝炎肝纖維化的血清多肽分子標記物。

背景技術

長期以來，肝穿刺活檢一直是明確肝病病因、評價肝臟炎癥壞死及纖維化程度的金標準，對預后判斷、治療選擇及療效評估等具有重要臨床意義，但創傷性、取樣誤差、觀察者自身及觀察者間偏倚等不足給臨床應用造成許多不便，目前臨床診療中迫切需要尋找便捷的非創傷性替代指標。

近年來，以血清指標組合建立肝纖維化診斷模型成為世界性的研究熱點。在一系列肝纖維化非創傷性診斷模型中，較具代表性的包括采用慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者建模的Fibrotest、Forns指數、APRI指數和HepascoreL等。而針對慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染的肝纖維化診斷模型仍研究較少，主要有上海市肝纖維化課題協作組(SLFG)所提出的Zeng模型M和我國香港的Hui模型。不過這些研究成果在我國慢性HBV感染患者中尚未得到有效驗證和臨床應用。

肝纖維化分期診斷的金標準目前國內外采用肝活組織檢查+病理學診斷，屬于有創傷性的診斷方法，因此臨床應用受局限。血清學檢測是臨床非創傷性肝纖維化診斷的有效方法，具有很好的應用前景。目前創新性的血清肝纖維化診斷分子標記物研究方法包括：蛋白和多肽組學、糖組學、microRNA芯片等技術；多肽組學研究的優點包括：技術新穎，血清檢測方便易行，國內開展具備一定可行性。多肽組學檢測人慢性乙型肝炎肝纖維化程度診斷尚未有國內外文獻報道。

發明內容

本發明的目的是提供一類非創傷性診斷慢性乙型肝炎肝纖維化的血清多肽分子標記物。

本發明的血清多肽分子標記物，作為一種非創傷性替代指標，能高效預測慢性乙型肝炎肝纖維化的程度，對預后判斷、治療選擇及療效評估等具有現實的臨床意義。

本發明提供了一組慢性乙型肝炎肝纖維化的血清多肽標記物，所述的多肽標記物是序列為SEQ?ID?NO?1-21的多肽中的一種或者幾種。按照表達量改變程度的不同，這組血清多肽標記物，可以分為兩組：SEQ?ID?NO?1-15的多肽中的一種或者幾種（表達量增加，上調），或者是SEQ?ID?NO?16-21的多肽中的一種或者幾種（表達量降低，下調）。

本發明的血清多肽分子標記物，它含有以下21種表達差異標志物：15種升高（SEQ?ID?NO?1-15）和6種降低（SEQ?ID?NO?16-21）。

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表1?血清多肽分子標記物

本發明還提供了上述的血清多肽標記物的檢測方法，取待測血清樣本，分離提純其中的多肽，檢測血清多肽標記物的含量。

檢測方法可以采用常規的已經報道的多肽檢測方法。例如，采用使用質譜、ELISA、HPLC或者小分子量電泳檢測所述的血清多肽標記物的含量。其中，ELISA即酶聯免疫吸附試驗（enzyme?linked?immunosorbent?assay）；HPLC即高效液相色譜法（High?Performance?Liquid?Chromatography），又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。

根據本發明的血清多肽標記物的含量判斷慢性乙型肝炎肝纖維化程度。例如，待測血清樣本中，序列為SEQ?ID?NO?1-15的多肽的含量為標準樣品含量的1.5倍及以上的，相應多肽的表達量異常。或者，序列為SEQ?ID?NO?16-21的多肽的含量為標準樣品含量的66%及以下的，相應多肽的表達量異常。本發明將早期纖維化組與晚期纖維化組做對比，以早期纖維化樣本為基準，血清多肽標記物表達量異常的樣本可初步判斷為晚期纖維化樣本。

根據本發明的血清多肽標記物可以制備慢性乙型肝炎肝纖維化的診斷試劑盒，該診斷試劑盒中含有上述的血清多肽標記物。除此以外，該診斷試劑盒還通常含有標準樣品或者早期纖維化樣本，使用說明，等等。

為了檢驗本發明的血清多肽標記物，于2010年收集45例不同肝纖維化分期（Scheuer分期S0-S4期，每組平均10例病例）慢性乙型肝炎肝纖維化病例，均以肝活檢病理學診斷明確纖維化程度，將S0、S1期列為早期纖維化組，S3、S4期列為晚期纖維化組，留取血清樣本。