[發明專利]新型多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品

有效

• 申請號: 201110050117.7
• 申請日: 2011-03-02
• 公開（公告）號: CN102113999A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發明（設計）人: 張惠;唐君;徐禮鮮
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K38/42;A61K38/51;A61K47/36;A61P7/08;A61K38/06
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責任公司 61108
• 代理人: 鮑燕平

1.新型的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品，其特征在于：該納米囊含有一帶正電荷的脂質體內核，外層通過層層自組裝的方法用殼聚糖/葡聚糖酸鈉這對多糖類的聚電解質進行修飾。

2.根據權利要求1所述的新型的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品，其特征在于：所述的血紅蛋白采用牛血紅蛋白，另外還有谷胱甘肽、碳酸酐酶影響血紅蛋白功能的酶。

3.根據權利要求1所述的新型的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品，其特征在于：所述帶正電荷的脂質體是陽離子脂質體是通過二棕櫚酸磷脂酰膽堿，膽固醇，以及雙十八烷基二甲基氯化氨制備而成的。

4.根據權利要求1所述的新型的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品，其特征在于：所述二棕櫚酸磷脂酰膽堿，膽固醇，以及雙十八烷基二甲基氯化氨的比例為1：1：0.05(摩爾比)。

5.多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品的制備方法是：它按如下步驟制備：

①.將二棕櫚酸磷脂酰膽堿，膽固醇，以及雙十八烷基二甲基氯化氨按一定比例溶于氯仿與甲醇的混合溶劑（4:1?v/v）中；

②.旋轉蒸發器將1中的混合溶液真空蒸發至呈干燥薄層；

③.將牛血紅蛋白、谷胱甘肽、碳酸酐酶等溶于pH=7的PBS中，慢慢將其溶液加入到有類脂的膜的燒瓶內，緩緩攪動，將此混懸液于4℃放置4-6天，待類脂充分水合后，通過孔徑為0.2μm的聚碳酸纖維膜，收集血紅蛋白微囊；

④.配置葡聚糖酸鈉和殼聚糖溶液；

⑤.將3中的脂質體配成溶液，逐滴加入到裝有葡聚糖酸鈉溶液的瓶中，磁力攪拌，控制滴速，滴加完成后，孵育6h以上；

⑥.離心洗滌步驟，離心步驟采用了多次速度遞增法；

⑦.用同樣的方法進行后面的包裹，即將Dextran換成Chitosan/Dextran，然后3次重復步驟5和6，最終得到包裹了7層聚電解質的納米囊，L?-(DE-CH)₃-DE（L：Liposome,即內層的脂質體層；DE:?Dextran），收集最終產物。

6.根據權利要求5所述的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述有機溶劑為三氯甲烷和甲醇的混合物，其比例為4：1。

7.根據權利要求5所述的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述的葡聚糖酸鈉的分子量為10?kDa，殼聚糖分子量為91.11?kDa，脫乙酰度為90%。

8.根據權利要求5所述的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述的葡聚糖酸鈉濃度為1mg/ml和殼聚糖濃度為1mg/ml溶液。

9.根據權利要求5所述的多層多糖結構修飾的血紅蛋白脂質體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述的血紅蛋白溶液為分子內聚合的牛血紅蛋白溶液。