[發(fā)明專利]新型多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110050117.7
• 申請日: 2011-03-02
• 公開（公告）號: CN102113999A
• 公開（公告）日: 2011-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張惠;唐君;徐禮鮮
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K38/42;A61K38/51;A61K47/36;A61P7/08;A61K38/06
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責(zé)任公司 61108
• 代理人: 鮑燕平

1.新型的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品，其特征在于：該納米囊含有一帶正電荷的脂質(zhì)體內(nèi)核，外層通過層層自組裝的方法用殼聚糖/葡聚糖酸鈉這對多糖類的聚電解質(zhì)進(jìn)行修飾。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品，其特征在于：所述的血紅蛋白采用牛血紅蛋白，另外還有谷胱甘肽、碳酸酐酶影響血紅蛋白功能的酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品，其特征在于：所述帶正電荷的脂質(zhì)體是陽離子脂質(zhì)體是通過二棕櫚酸磷脂酰膽堿，膽固醇，以及雙十八烷基二甲基氯化氨制備而成的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品，其特征在于：所述二棕櫚酸磷脂酰膽堿，膽固醇，以及雙十八烷基二甲基氯化氨的比例為1：1：0.05(摩爾比)。

5.多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品的制備方法是：它按如下步驟制備：

①.將二棕櫚酸磷脂酰膽堿，膽固醇，以及雙十八烷基二甲基氯化氨按一定比例溶于氯仿與甲醇的混合溶劑（4:1?v/v）中；

②.旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將1中的混合溶液真空蒸發(fā)至呈干燥薄層；

③.將牛血紅蛋白、谷胱甘肽、碳酸酐酶等溶于pH=7的PBS中，慢慢將其溶液加入到有類脂的膜的燒瓶內(nèi)，緩緩攪動，將此混懸液于4℃放置4-6天，待類脂充分水合后，通過孔徑為0.2μm的聚碳酸纖維膜，收集血紅蛋白微囊；

④.配置葡聚糖酸鈉和殼聚糖溶液；

⑤.將3中的脂質(zhì)體配成溶液，逐滴加入到裝有葡聚糖酸鈉溶液的瓶中，磁力攪拌，控制滴速，滴加完成后，孵育6h以上；

⑥.離心洗滌步驟，離心步驟采用了多次速度遞增法；

⑦.用同樣的方法進(jìn)行后面的包裹，即將Dextran換成Chitosan/Dextran，然后3次重復(fù)步驟5和6，最終得到包裹了7層聚電解質(zhì)的納米囊，L?-(DE-CH)₃-DE（L：Liposome,即內(nèi)層的脂質(zhì)體層；DE:?Dextran），收集最終產(chǎn)物。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述有機(jī)溶劑為三氯甲烷和甲醇的混合物，其比例為4：1。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述的葡聚糖酸鈉的分子量為10?kDa，殼聚糖分子量為91.11?kDa，脫乙酰度為90%。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述的葡聚糖酸鈉濃度為1mg/ml和殼聚糖濃度為1mg/ml溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多層多糖結(jié)構(gòu)修飾的血紅蛋白脂質(zhì)體納米囊血液替代品的制備方法，其特征是：所述的血紅蛋白溶液為分子內(nèi)聚合的牛血紅蛋白溶液。