[發明專利]干擾素誘導跨膜蛋白3在制備抗乙型肝炎病毒感染藥物中的用途

無效

• 申請號: 201110048468.4
• 申請日: 2011-03-01
• 公開（公告）號: CN102178927A
• 公開（公告）日: 2011-09-14
• 發明（設計）人: 王升啟;王學軍;李丹丹;趙海峰;李英;楊靜
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;A61K48/00;C07K14/435;C12N15/12;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/21;C12N1/19;A61P1/16;A61P31/20
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技術領域

本發明涉及一種生物化學物質在基因工程、蛋白質工程和制藥工程中的新用途，更具體地說就是干擾素誘導跨膜蛋白3(IFITM3)及其核苷酸編碼序列在制備治療乙型肝炎病毒(HBV)感染相關性疾病藥物中的應用。

背景技術

乙型肝炎病毒(HBV)感染嚴重威脅人類健康，是導致肝炎、肝硬化和肝癌的重要誘因。全世界有3.5億乙型肝炎病毒攜帶者，中國約有1.2億HBV攜帶者，其中2000多萬人為慢性乙肝患者，每年我國在慢性病毒性肝炎方面的直接治療費用超過500億人民幣。HBV感染不僅給患者及其家庭造成巨大的經濟和精神負擔，而且給國家造成了巨大的勞動力和經濟損失，乃至導致嚴重的就業等社會問題。

目前仍然缺乏有效的HBV治療藥物，疫苗雖然可起到一定的預防作用，但對已感染者及免疫耐受者無效。臨床應用的抗HBV藥物主要有干擾素以及一些核苷類似物。干擾素的治愈率有限，副作用較多，停用后通常會出現復發現象。核苷類似物如拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋等是HBV?DNA聚合酶的強抑制劑，能有效阻斷病毒復制，但長期用藥會導致病毒變異，產生耐藥性，而且部分病人停藥后會復發。因此，新型抗HBV藥物的研制具有重大的社會和經濟效益。

乙肝病毒的基因組含有四個基本閱讀框架，編碼四種蛋白，它們分別是表面蛋白(又稱為表面抗原，HBs)、核心蛋白(核心抗原，HBc)、聚合酶和X蛋白(HBx)。乙肝病毒基因的表達受到病毒四個基本啟動子和兩個增強子的調控，即核心蛋白啟動子/增強子II(ENII/Cp)、前表面蛋白啟動子(Sp1)、表面蛋白啟動子(Sp2)和X蛋白啟動子/增強子(ENI/Xp)。細胞內一些轉錄調控因子通過結合上述調控區從而調控乙肝病毒基因的表達。由于乙肝病毒基因組復制過程存在反轉錄，其模板是前基因組RNA(pgRNA)，因此，乙肝病毒基因的表達，特別是由Cp/ENII啟動的pgRNA的轉錄將直接關系到乙肝病毒能否順利復制和增殖，其在病毒的生活史中具有中心的地位。

干擾素誘導跨膜蛋白蛋白家族分子是一類人體自身產生的蛋白，首次發現于1984年，大多數細胞里這種蛋白的表達水平較低。最近研究顯示其家族分子IFITM1、IFITM2和IFITM3分子體外可顯著抑制H1N1流感病毒、西尼羅河病毒和登革熱病毒的感染。目前有關IFITMs蛋白分子抗乙型肝炎病毒的作用尚未見文獻報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種IFITMs蛋白家族分子用于治療HBV感染相關疾病中的新用途。具體說，本發明涉及IFITM3蛋白及其核苷酸編碼序列在制備治療HBV感染引起的相關疾病的藥物中的應用。

本發明提供一種IFITM3蛋白的醫藥新用途：以IFITM3蛋白3為活性成分，配以制藥可接受的載體，制成多種制劑，用以治療和預防HBV感染及其相關疾病。

所說的制藥可接受的載體包括藥用稀釋劑、穩定劑、賦形劑、吸收促進劑、促滲透劑、蛋白酶抑制劑、阻聚劑等，如甘氨酸、PH7.0磷酸鹽緩沖液、右旋糖酐、乳糖、氯化鈉、檸檬酸、明膠、注射用水、生理鹽水、脂質體、膽鹽、脂肪酸、皂角苷、辛酸鈉、月桂酸鈉、聚丙烯酸、梭鏈孢酸衍生物(如牛磺酸二氫梭鏈孢酸鹽、環糊精等)、甘油、A-zone、表面活性劑、脂肪酸、膽鹽、水楊酸鈉、Zonula?occludens?toxin(ZOT)、甘膽酸鈉、camostat?mesilate、bacitracin、aprotinin、大豆胰酶抑制劑、非離子表面活性劑、糖、甘露醇、山梨醇、PEG、人血清白蛋白等，可同時使用其中的一種或多種。

本發明藥物可制作適合于靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔給藥、肺部給藥、口服給藥以及透皮給藥用劑型，包括溶液型注射劑、凍干粉針、微球、粉末、粉霧劑、氣霧劑、腸溶衣、毫微球、微乳、復乳等劑型。

根據本發明，細胞內高表達IFITM3蛋白或其突變體蛋白均可特異性抑制乙肝病毒的復制和表達，IFITM3可能成為治療及預防HBV感染相關疾病的新型生物工程藥物。

本發明另一方面提供了一種編碼本發明蛋白的核苷酸序列。根據本發明，將含有IFITM3表達序列標簽(CDS)序列構建到pAAVMCS載體中與HBV復制載體共轉染HepG2細胞，能夠特異性抑制乙肝病毒的復制和表達，因此含有編碼IFITM3核苷酸序列的載體可能成為制備治療及預防HBV感染相關疾病的生物工程藥物。

本發明另一方面提供了一種基因治療載體，所述構建物含有本發明上述核苷酸序列以及與所述核苷酸序列操作性相連的表達調控序列。