[發明專利]牡丹莖葉愈傷組織誘導方法

有效

• 申請號: 201110046908.2
• 申請日: 2009-05-11
• 公開（公告）號: CN102172220A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 王雁;朱向濤
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林業研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京凱特來知識產權代理有限公司 11260
• 代理人: 鄭立明;趙鎮勇

本申請為以下申請的分案申請：

申請號：200910083744.3；發明名稱：牡丹愈傷組織誘導方法；申請日：2009.5.11。

技術領域

本發明涉及一種愈傷組織培養方法，尤其涉及一種牡丹莖葉愈傷組織誘導方法。

背景技術

牡丹為中國十大名花之一，也是中國的國花，有“花中之王”的美譽。牡丹組織培養主要是利用芽進行誘導植株和利用外植體通過愈傷組織途徑進行誘導，而牡丹的愈傷組織誘導對于再生植株是一個重要的階段，較高的愈傷組織誘導率對于后期愈傷組織的分化奠定良好的基礎，如何獲得較高的愈傷組織誘導率與培養基類型、激素的種類和濃度以及培養條件有密切的關系。

愈傷組織培養是一種最常見的培養形式，除莖尖分生組織培養和一部分器官培養以外，其他幾種植物組織培養形式最終都要經歷愈傷組織才能產生植株。此外愈傷組織還常常是懸浮培養的細胞和原生質體的來源。愈傷組織分為胚性愈傷組織和非胚性愈傷組織，胚性愈傷組織是指體細胞胚的愈傷組織，經過分化成幼嫩的植株。

現有技術中，牡丹組織培養研究已經有較長的歷史，研究內容也主要集中在外植體選擇、生長調節物質配比和培養基配方等領域，主要是利用莖尖直接發育成植株，而利用外植體誘導愈傷組織，然后利用愈傷組織分化產生植株的研究相對較少，而愈傷組織的誘導是愈傷組織分化產生植株的前提條件。

上述現有技術至少存在以下缺點：

存在愈傷組織誘導困難、生根率和生根質量不高、馴化移栽困難、褐化、玻璃化等問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種愈傷組織誘導率高的牡丹莖葉愈傷組織誘導方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

本發明的牡丹莖葉愈傷組織誘導方法，包括選取牡丹外植體，采用MS培養基進行愈傷組織的誘導，所述牡丹外植體包括莖，取材時期為：春季3月底4月初，取幼嫩的莖段或者由種子發芽形成的幼嫩的莖段；

莖的MS培養基包括：MS+NAA0.05mg/L+6-BA2.0mg/L+2，4-D1.0mg/L。

所述牡丹外植體還可以包括葉片，取材時期為：春季3月底4月初，取幼嫩的葉片或者由種子發芽形成的幼嫩的葉片；

葉片的MS培養基包括：MS+6-BA0.1mg/L+2，4-D0.5mg/L。

由上述本發明提供的技術方案可以看出，本發明所述的牡丹莖葉愈傷組織誘導方法，由于采用MS培養基進行牡丹莖葉愈傷組織的誘導，MS培養基中配有6-BA細胞分裂素、NAA植物生長調節劑、2，4-D除草劑等物質。選取適當時期的牡丹外植體和適當的培養基，愈傷組織誘導率高。

具體實施方式

本發明的牡丹莖葉愈傷組織誘導方法，其較佳的具體實施方式是，包括選取牡丹外植體，采用MS培養基進行愈傷組織的誘導，所述MS培養基中配有以下一種或多種物質：

6-BA細胞分裂素、NAA植物生長調節劑、2，4-D除草劑。

在進行愈傷組織的誘導前，可以先進行培養前處理：

首先，對所選取的牡丹外植體進行4℃低溫處理；

然后，利用2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，無菌水沖洗3-5次。

具體實施例：

以不同的外植體為例，采用不同的培養基和不同的培養條件達到了最佳的誘導效果。下面以不同外植體為對象分別進行闡述：

胚愈傷組織的誘導：

培養時期：每年的9月份，種子形成后；

培養前處理：利用低溫(4℃)處理和赤霉素處理相結合的方法，利用常規的消毒方法(2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，無菌水沖洗3-5次)消毒后接種；

最佳的培養基：MS+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L；

愈傷組織誘導率達到100％。

莖段愈傷組織誘導：

取材時期：取幼嫩的莖段，春季3月底4月初，或者由種子發芽形成的幼嫩的莖段；

培養前處理：利用常規的滅菌方法(2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，無菌水沖洗3-5次)進行消毒；

最佳的培養基：MS+NAA0.05mg/L+6-BA2.0mg/L+2，4-D1.0mg/L；

愈傷組織誘導率80％以上。

葉片愈傷組織誘導：

取材時期：取幼嫩的葉片，春季3月底4月初，或者由種子發芽形成的幼嫩的葉片；

培養前處理：利用常規的滅菌方法(2％NaClO消毒30min，70％酒精消毒30s，無菌水沖洗3-5次)進行消毒；