[發明專利]一株高蛋白酶活地衣芽孢桿菌及應用

無效

• 申請號: 201110043496.7
• 申請日: 2011-02-21
• 公開（公告）號: CN102174442A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 謝珍玉;周永燦;王世鋒
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/10
• 代理公司: ?？谙柘鑼＠聞沼邢薰?46001
• 代理人: 莫臻

技術領域

本發明屬生物工程技術領域，具體涉及一株高蛋白酶活地衣芽孢桿菌及應用。

背景技術

隨著水產養殖規模的持續擴大和集約化程度的不斷提高，水產養殖動物疾病的暴發越來越頻繁，因病害爆發而造成的損失也越來越大。引起水產養殖病害發生的原因雖然有很多，但因養殖水質惡化而導致的病原微生物爆發和水產養殖動物免疫力下降是其中的主要因素之一，況且，水產養殖雖然對促進經濟發展和人民生活水平提高發揮了重要作用，但因水產養殖廢水排放引起的水質污染近年來也越來越受到社會的高度關注，如何有效減少水產養殖廢水中污染物的排放量是水產養殖業可持續健康發展的一個迫切需要解決的重要問題。因此，建立一種無污染或少污染的新的無公害水產養殖模式是水產養殖業可持續健康發展的必由之路，其中，以蛋白質為主的大分子有機物的有效降解是成功建立這一養殖模式的最關鍵環節。

應用微生態制劑調節養殖水質具有成本低、無再污染、抑制病原菌生長等優點，已成為無公害水產動物健康養殖模式中的主要關注焦點之一。其中，地衣芽胞桿菌(B.licheniformis)是目前水產動物養殖水體凈化中最常用的菌種之一，它是一種好氧或兼性厭氧的革蘭氏陽性桿菌，對人體和環境安全，能夠大量產生胞外水解酶類而快速降解大分子蛋白質等有機質的細菌，也能促進H2S、亞硝酸鹽氧化，并且對環境具有較強的適應能力強、能在水體中快速生長繁殖的細菌。該菌種主要通過異養細菌的同化作用將高分子蛋白等轉化成小分子氨基酸和有機酸，這些產物又能進一步為水體中光合細菌、藻類以及其他浮游生物提供營養，同時抑制病原細菌的生長，從而使水體形成良好的微生態環境。如曹煜成等研究在草魚養殖過程中施用地衣芽孢桿菌De可使水體中的NH₃-N和NO₂-N在養殖中后期始終保持在較低水平，其平均值分別為0.12和0.015mg·L^-1，郝桂玉等、劉波和劉文斌在其它水產養殖動物的相關研究中也獲得了相似的結果；還有研究還表明，養殖過程中定期施用地衣芽孢桿菌有利于穩定養殖水體的pH值，使之維持在8.2～8.4之間，避免因水體pH變化過大造成養殖動物應激，也有利于形成良好的透明度及水色，促進養殖生物的健康生長。但由于受地理環境因素(溫度、鹽度、pH值)的影響，不同生長環境的地衣芽胞桿菌菌株對應于本地環境下的養殖水體凈化具有較好的效果，而對異地環境則經常表現出凈化效果差，凈化效果不穩定等。

目前，國內有關地衣芽孢桿菌微生態制劑的專利主要集中在肥料生產的發酵菌種(專利申請號：02133713.6、02114362.5、02111038.7、97119176.X等)和飼料添加劑(專利申請號：02115969.6、93110883.7等)等方面，未見有關養殖水質凈化的地衣芽孢桿菌專利，更未見關于地衣芽孢桿菌海南島地理種群的相關專利。

發明內容

本發明的目的是提供一株可用于水質改良的高蛋白酶活地衣芽孢桿菌。

本發明的另一目的是提供該菌株在養殖水水質改良中的應用。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種地衣芽孢桿菌菌株，該地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)菌株保藏名稱為：地衣芽孢桿菌Pb-WC09005，保藏單位：中國典型培養物保藏中心，保藏日：2011年1月25日，保藏號：CCTCC?NO：M2011037。在普通海水培養基上菌落為乳白色，扁平，表面粗糙、皺褶，邊緣不整齊，37℃培養24h的菌落直徑為3～5mm。

利用細菌16S?rDNA通用引物Pf：5′-AGA?GTT?TGA?TCC?TGG?CTC?AG-3′和Pr：5′-GGT?TAC?CTT?GTT?ACG?ACT-3′對地衣芽孢桿菌Pb-WC09005進行PCR擴增，測序后獲得1511bp的片段，在GenBank的登錄號為HM006905.1。其序列如基因序列表中<400>1所述序列。

本發明同時還提供該種地衣芽孢桿菌菌株的用途，用于養殖水水質的改良。

上述養殖水是指熱帶地區養殖水，包括淡水養殖水或海水養殖水。

本發明提供的地衣芽孢桿菌菌株，分離自海南熱帶養殖海水環境，該菌株的在不同溫度、鹽度、pH值條件下的具有較高的蛋白酶活性，對熱帶養殖等水體環境的具有較好的改良作用，為一種具有良好應用前景的菌株。

附圖說明

圖1是鹽度對地衣芽孢桿菌Pb-WC09005產酶活性的影響效果圖。

圖2是溫度對地衣芽孢桿菌Pb-WC09005產酶活性的影響效果圖。

圖3是pH值對地衣芽孢桿菌Pb-WC09005產酶活性的影響效果圖。