[發明專利]肝細胞核因子1α治療慢性肝病的用途

有效

• 申請號: 201110043321.6
• 申請日: 2011-02-23
• 公開（公告）號: CN102552935A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 謝渭芬;林勇;曾欣;錢慧;施健
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K38/17;A61K31/7088;A61P1/16
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

技術領域

本發明涉及分子生物學、細胞生物學、基因工程以及臨床醫學如疾病治療領域。具體地，本發明涉及利用肝細胞核因子1α(HNF1α)治療人慢性肝病、肝硬化。本發明還涉及將HNF1α基因和蛋白導入人慢性肝病、肝硬化肝臟組織和細胞的方法以及提高這些組織和細胞內HNF1α表達的手段。

背景技術

慢性肝病、肝硬化是臨床常見的慢性疾病，治療難度大，臨床預后差，占用了巨大的醫療資源，是危害國民健康的重大疾病。肝纖維化(hepatic?fibrosis)是各種慢性肝病發展至肝硬化的必經階段，是肝臟對慢性損傷的一種修復反應，以細胞外基質(extracellular?matrix，ECM)在肝內過多沉積為特征。目前認為，肝纖維化為一動態過程，屬可逆性病變。因此，阻斷、抑制或逆轉肝纖維化是治療慢性肝病的一個重要手段。肝纖維化發生的中心環節是肝星狀細胞(hepatic?stellate?cell，HSC)激活并向肌成纖維樣細胞(myofibroblasts，MFs)轉化，抑制HSC激活、增殖與遷移、誘導凋亡是肝纖維化治療的重要策略。上皮細胞間質轉型(epithelial-to-mesenchymal?transition，EMT)主要是指上皮細胞在細胞形態、細胞結構、細胞功能以及細胞粘附、遷移能力等方面獲得間質細胞特性的過程。一系列研究表明，肝細胞、HSC、膽管上皮細胞也通過EMT轉化為MFs，是肝纖維化進展過程中的重要環節。這些研究是肝纖維化機制與治療領域新的突破。

肝細胞核因子1(hepatocyte?nuclear?factor，HNF1)屬于POU-同源結構域家族，是調控肝細胞分化和維護肝細胞生物學功能的重要轉錄蛋白，在分化成熟的肝細胞中高表達，其中HNF1α是HNF1的重要亞型。對HNF1α基因敲除小鼠研究發現：HNF1α是肝臟發生發育中必需的轉錄因子，與建立和維持胚胎肝臟的最終正常分化發育密切相關，HNF1α基因敲除小鼠可出現嚴重肝腎功能損害，多于出生后數天內死亡。HNF1α以同源或與HNF1β形成異源二聚體的形式與順式作用元件結合，與一些轉錄激活蛋白相互作用來改變啟動子或增強子附近的染色體結構，從而在轉錄水平實現對分化和功能基因表達的調控。盡管既往研究證實HNF1α在維持肝臟功能和肝臟發育過程中發揮重要作用，該轉錄因子與肝纖維化之間的關系尚不明確；其能否起到阻斷或肝逆轉纖維化仍未得到證實；對肝纖維化的治療作用也不明確。國內外亦未將上調HNF1α表達作為抗肝纖維化治療手段加以研究。我們研究的創新之處在于：利用基因工程技術體外調控HSC中HNF1α基因表達，證實其對HSC活化增殖以及EMT進程的抑制作用，同時進一步研究其可能的分子生物學機制；通過體內HNF1α腺病毒載體注射明確HNF1α表達上調對肝纖維化進程的阻斷和逆轉作用，這是利用轉錄因子治療慢性肝病研究領域的全新探索。

發明內容

本發明的目的在于提供一種人類HNF1α基因及其產物HNF1α蛋白作為治療慢性肝病的用途；

本發明的另一個目的在于提供一種治療慢性肝病的方法。

本發明的上述目的是通過如下技術方案來實現的：

本發明公開了人類HNF1α基因或其編碼蛋白作為慢性肝病基因治療藥物的用途。

還提供了慢性肝病基因治療的方法，包括將HNF1α基因導入肝臟實質細胞和間質細胞，使之表達，所述將HNF1α基因導入肝臟實質細胞和間質細胞的方法包括用質粒轉染、腺病毒或腺相關病毒介導。

本發明還提供了一種用于藥物治療慢性肝病的藥物組合物，包括人類HNF1α基因和/或其編碼蛋白，和/或藥用載體或賦形劑，和/或其他已知的治療慢性肝病藥物。

本發明還提供了一種治療慢性肝病的方法，包括將有效量的上述藥物組合物給藥于需要這種治療的患者。上述藥物組合物通過口服，肌內，靜脈內，皮下等途徑來傳送。

本發明所述的慢性肝病包括肝纖維化和肝硬化。

附圖說明

附圖1.免疫組化法及real-time?PCR檢測人肝硬化組織及相對正常肝組織中HNF1α蛋白及mRNA的表達。

附圖2.HNF1α治療DMN肝損傷大鼠模型示意圖。

附圖3.HNF1α治療BDL肝損傷大鼠模型示意圖。

附圖4.表達HNF1α的重組腺病毒AdHNF1α經尾靜脈注射導入不同類型肝纖維化大鼠體內對肝纖維化進程的抑制作用。