[發明專利]一種獲得蕓薹屬A基因組蔬菜新種質的方法及應用方法

無效

• 申請號: 201110041678.0
• 申請日: 2011-02-22
• 公開（公告）號: CN102144560A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 馮輝;章云;王愛杰;劉洋;劉志勇;李承彧;冀瑞琴;王玉剛
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H5/12
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責任公司 21101
• 代理人: 張述學

1.一種獲得蕓薹屬A基因組蔬菜新種質的方法，主要步驟包括：

A、對蕓薹屬‘大白菜亞種×小白菜亞種’或‘小白菜亞種內變種×變種’蔬菜進行雜交獲得種子，種植F₁并自交獲得F₂；

B、在溫室中培養F₁和F₂，F₁和F₂的種子經過2~4℃低溫處理20~25天，在開花期對F₁和F₂代中篩選出的符合育種目標的植株進行游離小孢子培養，接種小孢子后需33℃暗培養1天,再轉至25℃培養箱靜置暗培養10～15天，肉眼可見胚狀體后，將培養皿轉移到轉數為40～60轉/分鐘搖床上繼續暗培養，培養溫度為25℃；

C、將子葉期胚狀體轉接到MS培養基以獲得再生植株;

D、將再生植株接種到MS培養基上進行人工誘導生根,待再生植株生根后，移栽到溫室，溫室溫度白天應為20～25℃，夜間溫度應為于5～10℃；

E、經50-70天后，再生植株開始開花，鑒定再生植株倍性，單倍體植株用秋水仙堿處理，使其加倍，雙單倍體植株、高倍體植株保留;

F、對雙單倍體植株、高倍體植株自交授粉，獲得種子，同時測定親和指數；

G、種植雙單倍體、高倍體自交種子，根據育種目標，鑒定植株株高、葉長、葉色等外觀性狀，鈣、鎂、維生素C諸營養指標，抗病、抗逆性。

2.根據權利要求1所述的獲得蕓薹屬A基因組蔬菜新種質的方法，其特征是：在B步驟中，對F₁和F₂植株進行游離小孢子培養，選取花瓣長度與花藥長度比值為0.5～0.75的未開放花蕾，在超凈工作臺內表面滅菌后，用蒸流水沖洗3遍，倒入蔗糖濃度為130g/L?的B5培養基，擠碎花蕾，使小孢子游離出來，含小孢子的懸浮液用400目孔徑的尼龍網過濾，收集濾液于10?mL離心管中，1000?rpm離心3?min;棄去上清液，重復2次;用NLN培養基稀釋小孢子，接種細胞密度1×10⁵~2×10⁵個·mL^-1?,以每皿5?mL小孢子懸浮液分裝入60?mm×15?mm的無菌玻璃培養皿內,?每皿添加100μL高溫濕熱滅菌后的瓊脂糖0.5?g/L、活性炭10?g/L混合液；NLN培養基為含130g/L蔗糖，無任何激素的NLN培養基，或在NLN培養基添加0.05?mg/L~0.2?mg/L的6-BA，或在NLN培養基添加0.05?mg/L~0.2?mg/L的6-BA與NAA。

3.根據權利要求1所述的獲得蕓薹屬A基因組蔬菜新種質的方法，其特征是：在C步驟中，誘導再生植株的MS培養基為含蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L~7.5?g/L，pH值為5.8~6.0，無任何激素的MS培養基；D步驟中，生根培養基為MS培養基，含蔗糖30g/L，瓊脂5.0g/L，NAA0.1~0.2mg/L，pH值為5.8~6.0。

4.一種如權利要求1所述獲得蕓薹屬A基因組蔬菜新種質的應用方法：將雙單倍體品系直接作為品種應用，或作為親本與雄性不育系配制雜交組合，或者選兩個自交不親和系配制雜交組合。