[發(fā)明專利]人miR-1539的反義寡聚核苷酸及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110040601.1
• 申請日: 2011-02-18
• 公開（公告）號: CN102643808A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁侃;張佩琢;李捷;沈孝坤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海藥物研究所;蘇州吉瑪基因藥物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P35/00;A61P25/00
• 代理公司: 北京金信立方知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11225
• 代理人: 朱梅;劉曄

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)材料技術(shù)領(lǐng)域和藥物領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種microRNAs(miRNA)反義寡聚核苷酸，尤其是涉及人microRNA-1539(人miR-1539)反義寡聚核苷酸及其應(yīng)用。該反義寡聚核苷酸可與人miR-1539互補(bǔ)，從而抑制人miR-1539的表達(dá)而起到抗腫瘤的作用。本發(fā)明還涉及包含該miRNA反義寡聚核苷酸的藥物組合物。

背景技術(shù)

miRNAs(又稱為microRNA或微小RNA)是小的非編碼RNA，長度為20-25bp，通常是由RNA聚合酶II?(Pol?II)轉(zhuǎn)錄的，一般最初產(chǎn)物為大的具有帽子結(jié)構(gòu)(7MGpppG)和多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)的pri-miRNA(primary?miRNA，初級miRNA)。這些pri-miRNA在RNase?III?Drosha和其輔助因子Pasha的作用下被處理成70個核苷酸組成的前體miRNA(precursor?miRNA，pre-miRNA)。RAN-GTP和exportin?5(輸出蛋白5)將這種前體分子輸送到細(xì)胞質(zhì)中。隨后，另一個RNase?III?Dicer(核糖核酸內(nèi)切酶)將其剪切產(chǎn)生約為22個核苷酸長度的雙鏈。這種雙鏈很快被引導(dǎo)進(jìn)入miRISC(miRNA-induced?silencing?complex，miRNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物)復(fù)合體中，其中含有Argonaute蛋白(AGO蛋白)，并且成熟的單鏈miRNA保留在這一復(fù)合物中。成熟的miRNA結(jié)合到與其互補(bǔ)的mRNA的位點(diǎn)通過兩種依賴于序列互補(bǔ)性的機(jī)制負(fù)調(diào)控基因表達(dá)，與靶mRNA不完全互補(bǔ)的miRNA在蛋白質(zhì)翻譯水平上抑制其表達(dá)。然而，最近也有證據(jù)表明，這些miRNA也有可能影響mRNA的穩(wěn)定性。使用這種機(jī)制的miRNA結(jié)合位點(diǎn)通常在mRNA的3’端非翻譯區(qū)。如果miRNA與靶位點(diǎn)完全互補(bǔ)(或者幾乎完全互補(bǔ))，那么這些miRNA的結(jié)合往往引起靶分子mRNA的降解。miRNAs在物種進(jìn)化中相當(dāng)保守，在動物，植物和真菌等中發(fā)現(xiàn)的miRNAs表達(dá)均有嚴(yán)格的組織特異性和時序性。

目前，只有很小一部分miRNAs的生物學(xué)功能得到闡明。這些miRNAs調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和組織分化，與生物生長發(fā)育有關(guān)。一系列的研究表明：miRNAs在細(xì)胞生長和凋亡、血細(xì)胞分化、同源異形盒基因調(diào)節(jié)、神經(jīng)元的極性、胰島素分泌、大腦形態(tài)形成、心臟發(fā)生和胚胎后期發(fā)育等過程中發(fā)揮重要作用。例如，miR-273參與線蟲的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程；miR-430參與斑馬魚的大腦發(fā)育；miR-181控制哺乳動物造血細(xì)胞分化為B細(xì)胞；miR-375調(diào)節(jié)哺乳動物胰島細(xì)胞發(fā)育和胰島素分泌；miR-143在脂肪細(xì)胞分化起作用；miR-196參與了哺乳動物四肢形成，miR-1與心臟發(fā)育有關(guān)。另有研究人員發(fā)現(xiàn)許多神經(jīng)系統(tǒng)的miRNAs在大腦皮層培養(yǎng)中受到時序調(diào)節(jié)，表明其可能控制著區(qū)域化的mRNA翻譯。

miRNA表達(dá)與多種癌癥相關(guān)，并且這些基因可能起到腫瘤抑制基因或是癌基因作用。最先在B細(xì)胞慢性淋巴性白血病(CLL)中發(fā)現(xiàn)有miRNA表達(dá)水平的改變，隨后陸續(xù)在各種人類腫瘤中均檢測到miRNA表達(dá)水平的變化。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs與腫瘤形成相關(guān)，既能發(fā)揮腫瘤抑制基因的作用(如miR-15a和miR-16-1)，又能起到癌基因的作用(如miR-155和miR-17-92簇)。目前認(rèn)為，在腫瘤細(xì)胞中，有些miRNA成熟體或前體表達(dá)水平異常，而表達(dá)異常的miRNA通過影響靶mRNA翻譯發(fā)揮作用，參與腫瘤形成過程，并起重要作用。如Ras原癌基因受let-7家族的調(diào)控，BCL2抗凋亡基因受miR-15a-miR-16-1簇調(diào)控，E2F1轉(zhuǎn)錄因子受miR-17-92簇調(diào)控，BCL6抗凋亡基因受miR-127的調(diào)控等。miRNAs的表達(dá)下調(diào)也和腫瘤發(fā)生有密切關(guān)系，這預(yù)示著miRNA具有癌基因的功能。例如，miR-143和miR-145在結(jié)腸癌中明顯下調(diào)。有趣的是，其發(fā)夾結(jié)構(gòu)的前體分子在腫瘤和正常組織中含量相似，這表明，miRNAs的表達(dá)下調(diào)可能是由于其加工過程受到破壞。但是，miR-143和miR-145的腫瘤抑制基因功能可能不僅僅局限于結(jié)腸癌，在乳腺癌、前列腺癌、子宮癌、淋巴癌等細(xì)胞系中其表達(dá)量也明顯下調(diào)。另一個報道表明，miR-21在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中表達(dá)增加。這個基因在腫瘤組織中的表達(dá)量比在正常組織中高5-100倍。