[發(fā)明專利]MD昆蟲小分子生物活性肽中間體生產(chǎn)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110032386.0
• 申請日: 2011-01-28
• 公開（公告）號: CN102174072A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸源;張昌郴
• 申請（專利權(quán)）人: 張如英;韋秀鳳
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 杭州華鼎知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33217
• 代理人: 韓洪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種昆蟲生物活性肽生產(chǎn)方法，尤其涉及一種MD昆蟲小分子生物活性肽中間體生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

以前，人們認(rèn)為氨基酸是人體吸收蛋白質(zhì)的主要途徑。近二、三十年來，經(jīng)科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)經(jīng)消化道酶促水解后，主要以小肽的形式吸收，比完全游離氨基酸更容易、更快速、更有效的被人體細胞、組織、機體吸收。

家蠅(Musca?domestica)即MD昆蟲，的小分子生物活性肽中間體和其它小分子生物活性肽一樣是具有特殊生理功能的肽，它是蛋白質(zhì)中20個天然氨基酸以不同組成和排列構(gòu)成的從二肽到復(fù)雜的線形，環(huán)形結(jié)構(gòu)的不同肽的總稱，是源于蛋白質(zhì)的多功能最復(fù)雜的化合物。

生物學(xué)界發(fā)現(xiàn)，MD昆蟲的蛋白質(zhì)是昆蟲蛋白質(zhì)中質(zhì)量最好之一，MD昆蟲體內(nèi)含有的小分子肽也是最豐富的，含量達12.9％而其它絕大多數(shù)昆蟲體內(nèi)的小分子肽含量都很低，在提取的MD昆蟲活性蛋白中間體中，小分子生物活性肽含量高達27％，為所有昆蟲蛋白中之最。而且MD昆蟲繁殖速度極快，能夠提取的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)中分離提取的小分子肽的資源極其豐富，只要有精良的設(shè)備和先進的科學(xué)的提取工藝技術(shù)，MD昆蟲小分子肽中間體就能夠大量分離提取，其品質(zhì)也居所有昆蟲蛋白前列。但是在現(xiàn)有技術(shù)中，包括天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院劉絳光、張海鴻所著的《小分子肽分離方法研究進展》一文，報道了國內(nèi)外研究小分子肽的各種方法，(發(fā)表在中國生化藥物雜志)和河南工業(yè)大學(xué)糧油食品學(xué)院蒲首丞、華南理工大學(xué)食品與生物工程學(xué)院王金水所著的《生物活性肽的制備與應(yīng)用》一文，(發(fā)表在《糧食加工》)，以及其它關(guān)于小分子肽研發(fā)的報道，都沒有關(guān)于MD昆蟲小分子肽的報道。

現(xiàn)有技術(shù)中雖然有各種不同的小分子生物活性肽提取方法，但是尚無完全針對MD昆蟲小分子生物活性肽中間體的提取方法。因此MD昆蟲小分子生物活性肽中間體的提取成本過高，無法普及實施。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種MD昆蟲小分子生物活性肽中間體生產(chǎn)方法，進一步優(yōu)化MD昆蟲活性蛋白中間體，得到質(zhì)量更高更容易吸收的MD昆蟲小分子生物活性肽中間體，同時又要降低生產(chǎn)的成本，使得MD昆蟲小分子生物活性肽中間體能得以推廣。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

MD昆蟲小分子生物活性肽中間體的提取方法，包括以下步驟：

(1)MD昆蟲活性蛋白中間體精確稱量放入容器；

(2)將經(jīng)過(1)步驟的MD昆蟲活性蛋白中間體加入去離子水中充分振蕩，其中MD昆蟲活性蛋白中間體和去離子水體積比為1∶5-1∶8；

(3)將經(jīng)過(2)步驟的溶液沸水浴不少于10分鐘；

(4)對經(jīng)過(3)步驟的溶液進行離心作業(yè)；

(5)將經(jīng)過(4)步驟的溶液通過硝酸纖維素及醋酸纖維素復(fù)合微孔濾膜取上清液抽濾；

(6)將(5)步驟中生成抽濾液凍干成粉備用。

(7)用微生物吸附氧化法進行廢水處理。

優(yōu)選的，去離子水成分為電阻率≥17.5兆歐的超純水。

優(yōu)選的，所述(2)步驟中MD昆蟲活性蛋白中間體加入去離子水中時還添加了體積比為0.2％的聚乙二醇和體積比為0.1％的triton。

聚乙二醇作為助溶劑，分散劑能使MD昆蟲活性蛋白中間體充分混入去離子水中，而Triton是一種非離子型表面活性劑，它能溶解脂質(zhì)，以增加抗體對細胞膜的通透性。因此在混合時加入一定的聚乙二醇和triton能增加生產(chǎn)效率。

優(yōu)選的，所述(3)步驟中所述離心作業(yè)具體步驟為將液體傾入大容量離心機，調(diào)節(jié)好轉(zhuǎn)速及離心時間，以5000-7000r/min的離心速度運作15-20分鐘。過快或過慢得離心速度都會導(dǎo)致產(chǎn)品難以析出，或者析出時帶有其他雜質(zhì)。只有在合適的離心速度下進行離心，才能確保析出物中沒有其余的雜質(zhì)，這樣就能減少去除雜質(zhì)的步驟，降低生產(chǎn)成本了。

優(yōu)選的，所述(5)步驟中上清液抽濾的速率為5-10mL/min。

本發(fā)明由于采用了上述技術(shù)方案，簡化了工藝，降低了生產(chǎn)成本，尤其是MD昆蟲活性蛋白中間體和去離子水體積比為1∶5-1∶8，使得足夠量的MD昆蟲活性蛋白中間體充分溶于水中，確保最后分離的效果。沸水浴是為了加快反應(yīng)速度和抑制蛋白質(zhì)酶，防止蛋白質(zhì)被蛋白質(zhì)酶水解，使小分子肽在處理以后以后的液體中所占的比例提高。這樣最終產(chǎn)品析出量多，產(chǎn)量得以增加，生產(chǎn)成本降低。

具體實施方式

本發(fā)明一種MD昆蟲小分子生物活性肽中間體的提取方法，包括以下步驟：

(1)MD昆蟲活性蛋白中間體精確稱量放入容器；