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[發(fā)明專利]一種硫酸銅快速定量分析發(fā)酵液提取物中長(zhǎng)鏈二元酸含量的方法無(wú)效

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201110028098.8 申請(qǐng)日: 2011-01-26
公開(公告)號(hào): CN102183514A 公開(公告)日: 2011-09-14
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 林日輝;余運(yùn)玲 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 廣西民族大學(xué)
主分類號(hào): G01N21/78 分類號(hào): G01N21/78
代理公司: 暫無(wú)信息 代理人: 暫無(wú)信息
地址: 530006 廣西*** 國(guó)省代碼: 廣西;45
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 硫酸銅 快速 定量分析 發(fā)酵 提取物 中長(zhǎng) 二元酸 含量 方法
【說(shuō)明書】:

技術(shù)領(lǐng)域

發(fā)明涉及二元酸發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域的檢測(cè)方法,具體地,涉及一種利用硫酸銅比色法快速定量分析發(fā)酵液提取物中長(zhǎng)鏈二元酸的方法。

背景技術(shù)

長(zhǎng)鏈二元酸(long?chain?dicarboxylic?acids,DCAs)是指碳鏈中含有10個(gè)以上碳原子的脂肪族二元羧酸。長(zhǎng)鏈二元酸是重要的有機(jī)酸產(chǎn)品,用于合成高性能工程塑料尼龍1212、高檔服裝用尼龍熱熔膠和高級(jí)涂料等,市場(chǎng)需求量相當(dāng)大。用化學(xué)法生產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸存在技術(shù)、設(shè)備要求,高能耗大等缺點(diǎn),而且一些長(zhǎng)鏈二元酸也難以用化學(xué)方法制備,目前長(zhǎng)鏈二元酸的生產(chǎn)逐步采用微生物發(fā)酵法進(jìn)行。在長(zhǎng)鏈二元酸發(fā)酵過(guò)程中,必須經(jīng)常性的對(duì)發(fā)酵液中長(zhǎng)鏈二元酸含量進(jìn)行分析,以合理的控制發(fā)酵進(jìn)程。對(duì)發(fā)酵過(guò)程產(chǎn)酸量分析可以采用氣相色譜法、薄層色譜法、以及NaOH滴定法,其中氣相色譜法需使用價(jià)格昂貴的氣相色譜儀、還需對(duì)長(zhǎng)鏈二元酸進(jìn)行衍生處理,不但成本高、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng),而且對(duì)系統(tǒng)的各項(xiàng)要求也很高(中國(guó)科學(xué)院微生物研究所烴代謝組.微生物的正烷烴代謝Ⅰ假絲醉母的正烷經(jīng)代謝產(chǎn)物的研究.微生物學(xué)報(bào),1981,21(1):88-95);薄層色譜法同樣也存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、儀器設(shè)備要求高的問(wèn)題(王麗華等.薄層色譜法分析十三碳二元酸及其單、雙甲酯.石油化工高等學(xué)校學(xué)報(bào),2003,16(2):29-32)。NaOH滴定法由于操作簡(jiǎn)單,常用于發(fā)酵過(guò)程粗提產(chǎn)品中長(zhǎng)鏈二元酸的快速分析,但滴定法存在較大誤差一直難以克服。李占朝等研究表明:為了獲得較準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果,需要經(jīng)過(guò)多次重復(fù)實(shí)驗(yàn),取其平均值(李占朝.十二碳二元酸的重結(jié)晶精制工藝研究.北京化工大學(xué)碩士學(xué)位論文,2009,17-26.)。此外,發(fā)酵生產(chǎn)長(zhǎng)鏈二元酸粗提工藝大多采用酸沉淀法,直接利用NaOH滴定計(jì)算二元酸產(chǎn)量,提取物中無(wú)機(jī)酸殘留也會(huì)造成較大誤差。因此,研究建立一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、高效的長(zhǎng)鏈二元酸檢測(cè)方法,可供實(shí)驗(yàn)研究及實(shí)際生產(chǎn)的分析檢測(cè)所需。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種利用硫酸銅比色法快速定量分析發(fā)酵液提取物中長(zhǎng)鏈二元酸的方法。通過(guò)長(zhǎng)鏈二元酸與硫酸銅-甲醇溶液的Cu2+反應(yīng)形成沉淀,離心去除沉淀后,在600-850nm檢測(cè)上清液吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算長(zhǎng)鏈二元酸的含量。

本發(fā)明包括發(fā)酵長(zhǎng)鏈二元酸樣品的制備,比色法快速分析長(zhǎng)鏈二元酸含量?jī)刹糠帧2僮鞑襟E如下:

(1)發(fā)酵長(zhǎng)鏈二元酸樣品的制備

取體積為V1的發(fā)酵液加1mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至9.5、60℃下振蕩30min使長(zhǎng)鏈二元酸充分溶于水相中。離心使發(fā)酵液中固相、水相及發(fā)酵剩余烷烴分離,取出體積為V2的水相部分,用6mol/L?HCl調(diào)pH值至2.0,加入2倍V2體積的乙醚進(jìn)行抽提,分相后乙醚萃取液倒入燒杯中,再以2倍V2體積的乙醚重新萃取一次,合并萃取液,在通風(fēng)櫥中吹去乙醚,得到白色固體即為長(zhǎng)鏈二元酸粗提物。

(2)比色法快速分析長(zhǎng)鏈二元酸含量

①配制硫酸銅-甲醇溶液:稱取1g硫酸銅加入干燥的錐形瓶中,量取20-200mL甲醇與硫酸銅混合,搖勻,至硫酸銅完全溶解。

②檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇:取硫酸銅-甲醇溶液進(jìn)行光譜掃描,以最強(qiáng)吸收峰波長(zhǎng)為檢測(cè)分析波長(zhǎng)。對(duì)空白測(cè)定20次,方法的檢出限(3s/k)為0.011mg/mL。

③標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:精確稱量標(biāo)準(zhǔn)十二烷二酸25、50、75、100、125、150、175、200mg,加入5mL硫酸銅-甲醇反應(yīng)溶液,使標(biāo)準(zhǔn)十二烷二酸濃度分別為5、10、15、20、25、30、35、40mg/mL(每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣設(shè)3個(gè)平行),常溫120rpm振蕩反應(yīng)10-60min,5000rpm離心10min,取上清液于820nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。以O(shè)D820為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)十二烷二酸含量為縱坐標(biāo)繪制工作曲線,線性回歸方程為C1=-91.185×OD820+101.66,決定系數(shù)R2=0.9920。

④樣品中長(zhǎng)鏈二元酸含量分析:將一定量的待測(cè)物加入到5mL硫酸銅-甲醇反應(yīng)監(jiān)測(cè)溶液中,常溫120rpm振蕩反應(yīng)10-60min,5000rpm離心10min,取上清液于820nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。將吸光值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程中,即可計(jì)算出檢測(cè)反應(yīng)液中長(zhǎng)鏈二元酸的含量。根據(jù)以下公式即可算出發(fā)酵液中長(zhǎng)鏈二元酸含量(以十二烷二酸為標(biāo)準(zhǔn)):

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