[發明專利]基于重組大腸桿菌SOS效應的水質遺傳毒性檢測方法

有效

• 申請號: 201110022476.1
• 申請日: 2011-01-20
• 公開（公告）號: CN102175659A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 李力;賈瑞寶;孫韶華;宋艷
• 申請（專利權）人: 濟南市供排水監測中心
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種基于重組大腸桿菌SOS效應的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是包括以下步驟：

（1）制備大腸桿菌檢測液

a.將重組大腸桿菌貯藏物用改良的LB液體培養基進行培養，使其復蘇活化；

b.將步驟a得到的復蘇活化液加入到LB液體培養基中進行振蕩培養，培養至菌液OD值為0.3-0.5，得大腸桿菌檢測液；?

（2）將富集的待測水樣與大腸桿菌檢測液混合接觸，同時設立添加相同體積純溶劑的大腸桿菌檢測液作為對照；?

（3）將與待測水樣接觸過的大腸桿菌檢測液和對照組的大腸桿菌檢測液分別進行離心分離，收集菌體，菌體用PBS緩沖液洗滌后利用超聲法破碎菌體，得菌體破碎物；

（4）將菌體破碎物離心,收集上清液，利用熒光光譜儀檢測菌體的發射熒光強度，得待測水樣的熒光強度比值，待測水樣的熒光強度比值=與待測水樣接觸的菌體的發射熒光強度/對照組菌體的發射熒光強度；

（5）用不同濃度的Cr⁶⁺溶液分別與大腸桿菌檢測液接觸，采用上述（2）、（3）、（4）相同的方法測得不同Cr⁶⁺溶液的熒光強度比值；

（6）以Cr⁶⁺濃度作橫坐標，以熒光強度比值為縱坐標，繪制熒光強度比值對Cr⁶⁺濃度的標準曲線；

（7）將待測水樣的熒光強度比值代入標準曲線，以Cr⁶⁺濃度表示該水樣的水質毒性。

2.根據權利要求1所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：所述重組大腸桿菌為攜帶綠色熒光蛋白的大腸桿菌。

3.根據權利要求1所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：所述改良的LB液體培養基的組成為：胰化蛋白胨?10g/L,?酵母提取物?2.5g/L,?NaCl?5g/L。

4.根據權利要求3所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：復蘇活化時，改良的LB液體培養基中添加0.3?(v/w)%的葡萄糖。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：復蘇活化時，在30-35℃，150-200rpm的轉速下振蕩培養16-18小時。

6.根據權利要求1-4中任一項所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：復蘇活化液按照1/100的體積比加入到改良的LB液體培養基中，在35-37℃，180-250rpm的轉速下振蕩培養。

7.根據權利要求1-4中任一項所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：待測水樣或Cr⁶⁺溶液與大腸桿菌檢測液接觸時，加入量為大腸桿菌檢測液體積的0.1-20%。

8.根據權利要求1-4中任一項所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：待測水樣與大腸桿菌檢測液在35-37℃、180-250rpm的轉速下充分接觸1-2小時。

9.根據權利要求1-4中任一項所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：步驟（3）中，以8000-10000rpm的轉速將大腸桿菌接觸液離心分離2-5min；超聲法破碎菌體采用破碎4~8秒、間隔4~8秒、破碎15~25次的程序進行。

10.根據權利要求1-4中任一項所述的水質遺傳毒性檢測方法，其特征是：步驟（4）中，以12000-14000rpm的轉速將菌體破碎物高速離心8-10min。