[發明專利]一種檢測腦脊液中14-3-3蛋白的方法

無效

• 申請號: 201110009856.1
• 申請日: 2011-01-18
• 公開（公告）號: CN102146367A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 董小平;韓俊;姜慧英;張寶云;高建梅;高晨
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C07K16/18;G01N33/68
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• 代理人: 暫無信息

1.具有良好免疫反應性的14-3-3蛋白的制備。其特征在于利用本發明的方法進行14-3-3蛋白編碼基因的克隆及表達載體的構建，并純化出良好免疫原性的14-3-3重組蛋白。

2.特異性抗14-3-3蛋白抗血清的制備。其特征在于利用本發明的方法和權利要求1中制備的重組蛋白免疫動物，制備高特異性、高效價的14-3-3抗體。

3.用于腦脊液中14-3-3蛋白檢測方法的步驟。具體步驟如下：送檢的各種中樞神經系統疾病患者的腦脊液和懷疑為克雅氏病(CJD)患者的腦脊液樣品，進行常規樣品處理后，加入等量蛋白上樣緩沖液后，100℃變性5分鐘，經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)后，用權利要求2中制備的抗血清作為一抗，用辣根過氧化物酶標記的抗兔免疫球蛋白G(IgG)作為二抗，進行蛋白印跡法(Western?blot)檢測和顯色，結果為陽性的樣品即可以判定為腦脊液中14-3-3蛋白含量升高。