[發明專利]一種提取DNA和RNA的方法

無效

• 申請號: 201110009255.0
• 申請日: 2011-01-17
• 公開（公告）號: CN102140451A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 索勛;薩伊德;劉賢勇
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明涉及生物技術，具體的說，涉及一種提取DNA和RNA的方法。

背景技術

隨著生物技術日新月異的發展，DNA和RNA的提取技術也日益成熟和發展，目前已有大量的技術廣泛應用于實驗室、工業生產、制藥和動植物檢疫領域，也產生了大量的相關專利，如“一種用于核酸分離的磁性納米粒子復合物及其制法和應用(200610023144.4)”及“分離核酸的方法”(200680034578.2)等。

DNA和RNA在細胞中總是與各種蛋白質結合在一起的。DNA和RNA的分離主要是指將DNA和RNA與蛋白質、多糖、脂肪等生物大分子物質分開。在分離DNA和RNA時應保證DNA和RNA分子一級結構的完整性，排除其他分子污染。但是由于由于DNA和RNA提取樣品中含有碳水化合物、鞣酸、多酚及蛋白，甚至提取中使用的有機試劑如苯酚和氯仿，都會污染樣品，因此如何取得高純度的DNA和RNA，就成為所有研究者不得不面對的問題。

本發明的目的是提供一種提取DNA和RNA的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種從原核或真核生物來源材料中提取核酸，即DNA或RNA的方法。

本發明利用的是核苷酸分子磷酸基團帶負電荷的特性而開發的，使用飽和食鹽水中的正電荷中和上述磷酸基團的負電荷，然后沉淀分離，最后經過純化，得到DNA或RNA。

具體的說，本發明所述的提取DNA或RNA的方法包括如下步驟：

1)預處理：裂解原核或真核生物材料并用去污劑進行溶解處理，得到裂解消化產物；

2)將飽和食鹽水加入到裂解消化產物中，對生物材料中的蛋白進行沉淀處理；

3)分離沉淀相和液相，然后對液相中DNA或RNA進行分離和純化。

其中，步驟2)所述的鹽水為中性或酸性飽和鹽水，若需要提取DNA，則使用中性飽和鹽水；若需要提取RNA，則使用pH值5-6的酸性飽和鹽水；

其中，所述飽和食鹽水的體積用量為裂解消化產物體積的0.3-1倍；

所述中性飽和鹽水是將NaCl直接溶解在純水中煮沸制備；所述酸性飽和鹽水是向中性飽和鹽水加入鹽酸得到的，使pH值達到5-6。

步驟2)如下進行：先在每毫升的裂解消化產物中加入350μl的中性飽和鹽溶液；然后將上述溶液輕輕顛倒混勻，然后在室溫下放置5-15min；

步驟3)可按照本領域公知的技術進行，例如可如下進行：將上述溶液在室溫2500rpm離心15-30min，得含有DNA或RNA的上清液，然后對于含有DNA上清液采用下述方法：

1.沉淀DNA

1.1轉移含DNA的上清至新的Eppendorf管；

1.2室溫12000rpm離心10min，棄去上清；

2.洗滌DNA

2.1DNA沉淀加入75％乙醇；

2.2室溫10000rpm離心5min，棄去上清；

3.溶解DNA

3.1室溫條件下干燥DNA沉淀5min，然后溶于超純水中；

3.2對獲得的DNA進行定量并分裝保存于-80℃。

4.去除RNA污染物

4.1每毫升的DNA溶液中加入50μg的RNase；

4.2?37℃溫育1h。

注：去除RNA污染所使用的RNase處理法只能在提取的最后步驟中使用。如果需要脫鹽得到高質量的DNA，RNase處理后可用本操作法之步驟3和4進行。若要長久保存DNA，可用Tris-EDTA(TE)溶液溶解DNA以抑制核酸酶活性。

對于含有RNA上清液采用下述方法：

1.RNA沉淀

1.1轉移含RNA的上清至新的Eppendorf管；

1.2室溫12000rpm離心10min，棄去上清；

2.RNA洗滌

2.1RNA沉淀加入75％乙醇；

2.2室溫10000rpm離心5min，棄去上清；

3.RNA溶解

3.1室溫條件下干燥RNA沉淀5min，然后溶于DEPC處理后的超純水中；

3.2對獲得的RNA進行定量并分裝保存于-80℃。

4.去除基因組DNA污染物

此部分可用DNase?I(無RNase)試劑盒進行操作，具體步驟參見制造商的說明書。

在步驟1)中，依據生物材料的來源和數量的不同，所述預處理可如下進行：

1)對于較為大量的生物材料，采用液氮研磨法并隨后用去污劑進行溶解處理；