[發明專利]金絲桃素提純方法

無效

• 申請號: 201110008134.4
• 申請日: 2011-01-15
• 公開（公告）號: CN102079696A
• 公開（公告）日: 2011-06-01
• 發明（設計）人: 張俊松;王曉利;王金林
• 申請（專利權）人: 深圳職業技術學院
• 主分類號: C07C50/36
• 分類號: C07C50/36;C07C46/10
• 代理公司: 深圳市維邦知識產權事務所 44269
• 代理人: 黃莉

技術領域

本發明涉及金絲桃素制備技術，尤其是指一種金絲桃素提純方法。

背景技術

金絲桃素在貫葉金絲桃全草中的含量只有萬分之幾，市場上貫葉金絲桃提取物中金絲桃素含量也僅有0.3%左右。目前，對金絲桃素的研究主要集中在其提取工藝上，而對高純度的金絲桃素提純工藝研究較少。現有的高純度金絲桃素的分離過程中主要利用大孔樹脂、聚酰胺、硅膠等常規分離介質來制備金絲桃素，這種方式不僅工藝繁雜、金絲桃素純度低、得率不高，而且生產過程中需使用大量具有較高毒性的有機溶劑而不夠環保，并且易造成對成品的污染。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，提供一種金絲桃素提純方法，以便從貫葉金絲桃浸膏中分離純化高純度金絲桃素。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：一種金絲桃素提純方法，包括如下步驟：

準備步驟：將貫葉金絲桃浸膏粉碎，并加入乙醇溶液溶解后進行超聲提取獲得提取液，然后在提取液中加入明膠溶液除鞣，制得貫葉金絲桃浸膏除鞣液；

PEK微球層析步驟：將PEK微球與蒸餾水混懸，轉入層析柱，待PEK微球沉降完全后，以蒸餾水平衡柱床，取適量貫葉金絲桃浸膏除鞣液濕法上樣于PEK微球層析柱頂部，再用水-乙醇溶液體系進行梯度洗脫，并收集最后一次洗脫的洗脫液，濃縮制得金絲桃素粗品；

PDCX微球層析步驟：將PDCX微球與丙酮溶液混懸，轉入層析柱，待PDCX微球沉降完全后，以丙酮溶液平衡柱床，取以上制得的金絲桃素粗品以丙酮溶液充分溶解后取適量濕法上樣于PDCX微球柱頂部，再用丙酮溶液進行梯度洗脫，并收集最后一次洗脫的洗脫液，濃縮并調整PH值至2～3，低溫下靜置12±0.5h后離心分取沉淀，上清液再置于低溫下靜置12±0.5h，隨后再離心得沉淀，合并沉淀得金絲桃素精品；

ODS層析步驟：將反相硅膠填料與色譜純甲醇混懸，轉入層析柱，待反相硅膠微球沉降完全后，以甲醇-磷酸氫二鈉緩沖液平衡柱床，取以上制得的金絲桃素精品以甲醇充分溶解后取適量上樣于層析柱頂部，以甲醇-磷酸氫二鈉緩沖液洗脫，分步收集洗脫液，HPLC檢測后合并相同的成分，獲得金絲桃素提純物。

進一步地，準備步驟中，用于與貫葉金絲桃浸膏的粉碎物溶解的乙醇溶液為體積百分比濃度為60%的乙醇溶液，貫葉金絲桃浸膏與乙醇溶液的配比比例為：每1克貫葉金絲桃浸膏使用6～8mL60%的乙醇溶液，且溶解后超聲提取的時間為30±2分鐘。

進一步地，準備步驟中，加入的明膠溶液為10%明膠溶液，加入量為超聲提取液的1/5～1/4。

進一步地，在加入明膠溶液后再調整溶液中乙醇的體積濃度至75%～80%，避光靜置12±0.5h后，過濾濃縮后即制得貫葉金絲桃浸膏除鞣液。

進一步地，PEK微球層析步驟中，PEK微球的粒徑為35～45μm，層析柱徑高比1:10～3.5。

進一步地，PEK微球層析步驟中，梯度洗脫時所用的試劑依次分別為：1～2.5倍柱體積的水、1～3倍柱體積的10%乙醇溶液、1.5～6倍柱體積的30%乙醇溶液、1.5～4倍柱體積的40%乙醇溶液、4～8倍柱體積的60%乙醇溶液。

進一步地，PDCX微球層析步驟中，PDCX微球的粒徑為25～35μm。

進一步地，PDCX微球層析步驟中，分別用于與PDCX微球混懸、平衡柱床以及溶解金絲桃素粗品的丙酮溶液均為30%丙酮溶液。

進一步地，PDCX微球層析步驟中，梯度洗脫所用的丙酮溶液依次分別為：1～2倍柱體積的30%丙酮溶液、1～1.5倍柱體積的50%丙酮溶液、3～8倍柱體積的70%丙酮溶液。

進一步地，PDCX微球層析步驟中，使用鹽酸將濃縮液的PH值調至2～3；而在ODS層析步驟中所使用的甲醇-磷酸氫二鈉緩沖液中甲醇與磷酸氫二鈉的體積比比值為87.5/12.5，且甲醇-磷酸氫二鈉緩沖液預先以磷酸將PH值調至6.5。

本發明的有益效果如下：本發明利用納米微球材料來分離純化金絲桃素，其中，PEK微球具有機械強度高，化學穩定性好，可耐受較寬的PH和多種有機溶劑，對金絲桃素的吸附量較大，解吸附率高，金絲桃素回收率達到90.0%以上；而PDCX微球化學穩定性好，可耐受較寬的PH和多種有機溶劑，具有較高的分離度，適用于金絲桃素的精純。相對于諸如硅膠、大孔樹脂等傳統的層析填料，納米微球材料吸附量大，金絲桃素回收率高，最終產品中金絲桃素含量可達90%以上；此外，本發明方法步驟簡便、主要使用乙醇、丙酮等低毒性有機溶劑，且用量少，填料可重復使用，具有經濟、環保的優點。

附圖說明