[發(fā)明專(zhuān)利]一種蘋(píng)果汁中脂環(huán)酸芽孢桿菌PCR快速特異性檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110004200.0
• 申請(qǐng)日: 2011-01-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102134608A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-07-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樊明濤;焦凌霞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 西安恒泰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 61216
• 代理人: 李鄭建

1.一種蘋(píng)果汁中脂環(huán)酸芽孢桿菌PCR快速特異性檢測(cè)方法，其特征在于，具體按下列步驟進(jìn)行：

1）取1ml果汁菌懸液，經(jīng)10000r/min離心2min，棄上清，加50ul雙蒸餾水重懸；

2）重懸后的菌體經(jīng)微波1000W處理60s，5000r/min離心1min，取上清，得到模板DNA；

3）設(shè)計(jì)一對(duì)SHC引物JLX-F和JLX-R，其中：

引物JLX-F：5'-CGGCACCTGGTCCATTTATC-3'

引物JLX-R：5'-TCGAGCCCTTCAAACCCTTT-3'；

4）將模板DNA、引物JLX-F和引物JLX-R構(gòu)成25ul體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

5）1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)在648bp處獲得目的條帶，即得檢測(cè)結(jié)果。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增體系含2μl模板DNA，2μlDNTP，2.5μl?10倍buffer，10μmol·l^-1的引物JLX-F和引物JLX-R各1.5μl，以及0.2μl的rTaq?DNA聚合酶5U·μl^-1，PCR擴(kuò)增條件為：94℃預(yù)熱4min，然后進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，94℃解鏈45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，循環(huán)結(jié)束后，最后72℃延伸10min。