[發明專利]一種丙型肝炎病毒完整結構蛋白與GB病毒B的嵌合病毒

有效

• 申請號: 201110003393.8
• 申請日: 2011-01-10
• 公開（公告）號: CN102154227A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 黎誠耀;李婷婷;帥麗芳;王文敬
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/51;C12N15/40;C12N15/63
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所 44244
• 代理人: 胡濟元

技術領域

本發明涉及病毒、組合物及其制備或純化領域，特別涉及以引入外來基因材料修飾的病毒領域。

背景技術

目前全世界范圍內，大約有1.7億人感染了丙型肝炎病毒(Hepatitis?C?Virus，HCV)。丙型肝炎病毒是經血液傳播的、引起急/慢性肝炎的主要致病因子之一，全球各地HCV感染流行狀況差異較大，以發展中國家最為嚴重。丙型肝炎病毒感染者中50-85％發展成為慢性肝炎，其中10-20％進一步發展為諸如肝硬化等復合慢性肝病，1-5％的病人在二三十年后發展為肝癌。然而，目前對丙型肝炎病毒感染仍缺乏十分有效的治療藥物，更嚴峻的是，迄今全球還沒有丙肝預防性疫苗。直到今天丙型肝炎的研究也還沒有取得突破性的進展，關鍵因素是由于丙型肝炎病毒只能感染人類和黑猩猩，因此缺乏理想的丙型肝炎病毒感染小型靈長類動物模型，極大地限制了丙型肝炎病毒免疫防治的研究。

丙型肝炎病毒是一種黃病毒科肝病毒屬的病毒，其基因組由結構(核心，囊膜)和非結構(蛋白酶，螺旋酶，酶輔助因子)蛋白及非編碼區組成。丙型肝炎病毒核心蛋白(Core)為病毒核衣殼的重要組成部分，與糖蛋白作用組裝出完整的HCV病毒顆粒，可以通過與病毒RNA的結合來調節HCV基因組的翻譯，具有基因調控作用，可以參與HCV感染后的免疫調控。囊膜蛋白(E)二聚體(E1E2，含p7蛋白)直接介入與宿主細胞的相互作用，并誘導機體產生中和抗體和特異性細胞免疫，是主要的保護性抗原。然而，自然感染(野生)毒株尚不能細胞培養，特別是尚無有效的小型靈長類動物感染模型模擬真實的丙型肝炎病毒感染，極大地限制著丙型肝炎病毒免疫研究。

現有技術中，利用嵌合病毒的研究已見于HCV/HIV、HCV/VSV、HCV/YFV、HCV/CSFV、HCV/BVDV和HCV/PV。這些構建的HCV嵌合病毒或稱偽病毒(pseudotype?virus)主要用于丙型肝炎病毒蛋白與細胞的相互作用、中和抗體測定，以及基因調控等研究。由于這些骨架病毒均無嗜肝細胞性，故不能用于丙型肝炎疫苗免疫防治研究。

GB病毒B(GBV-B)是一種最近似丙型肝炎病毒，同屬黃病毒科肝病毒屬的病毒。與丙型肝炎病毒不同，GB病毒B可在小型靈長類動物狨猴common?marmoset(Callithrix?jacchuejacchus)和小娟猴(Tamarin，Saguinus?spp)體內復制并導致急或慢性肝炎。但是GB病毒B仍然與丙型肝炎病毒存在差異，不能完全模擬丙型肝炎病毒在靈長類動物體內的感染和免疫狀態，因此，如果以GB病毒B基因組為骨架，以丙型肝炎病毒的功能基因取代GB病毒B的相應功能區，構建HCV/GBV-B嵌合病毒，則是利用感染模型研究丙型肝炎病毒免疫的理想方案。然而，由于將丙型肝炎病毒的完整功能蛋白基因替換到GB病毒B基因組中存在一定的困難，并且構建的含完整功能蛋白的嵌合病毒是否能夠感染小型靈長類動物存在不確定性和風險性，因此，目前利用HCV/GBV-B嵌合病毒的研究僅見于將較小基因片段的丙型肝炎病毒的5’-NCR，p7或HVR1替換到GB病毒B基因組中，這些只包含了丙型肝炎病毒很短基因片段的嵌合病毒只能用于研究這些特定基因片段的功能，無法表明丙型肝炎病毒與宿主之間的相互作用，不能完全模擬丙型肝炎病毒在靈長類動物體內的免疫反應。上述將丙型肝炎病毒的5’-NCR，p7或HVR1替換到GB病毒B基因組中的方案，參見Rijnbrand，R.et?al.Achimeric?GB?virus?B?with?5’nontranslated?RNA?sequence?from?hepatitis?C?virus?causeshepatitis?in?tamarins.Hepatology.41，986-994(2005)、Takikawa，S.et?al.Functionalanalyses?of?GB?virus?B?p13?protein：Development?of?a?recombinant?GB?virus?B?hepatitisvirus?with?a?p7?protein.Proc?Natl?Acad?Sci?USA.103，3345-3350(2006)、Haqshenas，G.，Dong，X.，Netter，H.，Torresi，J.&Gowans，E.J.A?chimeric?GB?virus?B?encodingthe?hepatitis?C?virus?hypervariable?region?1?is?infectious?in?vivo.J.Gen.Virol.88，895-902(2007).和Griffin，S.et?al.Chimeric?GB?virus?B?genomes?containinghepatitis?C?virus?p7?are?infectious?in?vivo.J.Hepatol.49，908-915(2008)等文獻的報導。