[發明專利]一種丙型肝炎病毒完整囊膜蛋白與GB病毒B的嵌合病毒

無效

• 申請號: 201110003392.3
• 申請日: 2011-01-10
• 公開（公告）號: CN102154226A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 黎誠耀;李婷婷;王文敬;張玲
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/51;C12N15/40;C12N15/63
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所 44244
• 代理人: 胡濟元

1.一種丙型肝炎病毒完整囊膜蛋白與GB病毒B的嵌合病毒，該嵌合病毒由GB病毒B的5’端非編碼區及核心蛋白基因序列、丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因序列和GB病毒B的非結構蛋白及3’端非編碼區序列依次連接構成。

2.權利要求1所述的丙型肝炎病毒完整囊膜蛋白與GB病毒B的嵌合病毒，其特征在于，所述的丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因序列是1b基因型丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因序列。

3.一種權利要求1所述的嵌合病毒的構建方法，該方法由以下步驟組成：

(1)從1b型丙型肝炎病毒血清樣本中提取出RNA并RT-PCR逆轉錄為eDNA，然后巢式PCR擴增丙型肝炎病毒的完整結構蛋白基因片段并與pMD-20T載體連接，得到含有丙型肝炎病毒完整結構蛋白基因片段的質粒；其中所述巢式PCR擴增的引物如下：

上游外引物序列為SEQ?ID?NO：2所示的序列；

下游外引物序列為SEQ?ID?NO：3所示的序列；

上游內引物序列為SEQ?ID?NO：4所示的序列；

下游內引物序列為SEQ?ID?NO：5所示的序列；

(2)取GB病毒B全基因組的質粒，采用PCR方法從中擴增GB病毒B的完整囊膜蛋白基因上游的NotI-core和下游NS2-AflII兩基因片段；取步驟(1)所得到的質粒，采用PCR方法從中擴增丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段；其中，

擴增GB病毒B的NotI-core基因片段的上游引物序列為SEQ?ID?NO：6所示的序列；

擴增GB病毒B的NotI-core基因片段的下游引物序列為SEQ?ID?NO：7所示的序列；

擴增丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段的上游引物序列為SEQ?ID?NO：8所示的序列；

擴增丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段的下游引物序列為SEQ?ID?NO：9所示的序列；

擴增GB病毒B的NS2-AflII基因片段的上游引物序列為SEQ?ID?NO：10所示的序列；

擴增GB病毒B的NS2-AflII基因片段的下游引物序列為SEQ?ID?NO：11所示的序列；

將擴增的PCR產物分別進行電泳并凝膠回收目的條帶，所得到的三段DNA用OverlappingPCR的方法，按丙型肝炎病毒的完整囊膜蛋白基因片段、GB病毒B的NS2-AflII基因片段和GB病毒B的NotI-core基因片段順序進行連接，得重組DNA片段；

另取GB病毒B全基因組的質粒用NotI與AflII進行雙酶切，回收去除NotI與AflII兩位點間含有GB病毒B的完整囊膜蛋白基因片段的DNA片段，并與所述重組DNA片段連接，得嵌合全基因組質粒；

(3)將所得嵌合全基因質粒的全基因組序列于SacI位點切斷，并以其為模板，由T7?RNA聚合酶轉錄合成嵌合病毒的RNA。