[發(fā)明專(zhuān)利]褐飛虱對(duì)苯基吡唑類(lèi)殺蟲(chóng)劑抗藥性分子檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110003232.9
• 申請(qǐng)日: 2011-01-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102154461A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉澤文;姚香梅;丁志平;劉淑華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀(jì)昌

1.一種褐飛虱對(duì)苯基吡唑類(lèi)殺蟲(chóng)劑抗藥性分子檢測(cè)方法，其特征在于如下步驟實(shí)現(xiàn)：

a、提取單頭褐飛虱2-3齡若蟲(chóng)基因組DNA；

b、PCR反應(yīng)體系

2.5?μL?10×Buffer，1.25?U?Ex-Taq?DNA?polymerase，2.5?μL單頭褐飛虱基因組DNA，終濃度0.2?mmol/L的dNTPs、?1?mmol/L的?MgCl₂，1?μmol/L的內(nèi)引物、外引物，加雙蒸水至反應(yīng)總體積為25?μL；其中所述的外引物?P：GGCTGATCGTCATCATATCGTGG；?Q：GCAACGACGCGAACACCATGACG；內(nèi)引物?A：TGCGACACCGGCACGAGTGT；B：CGGTGGTGACGCCGAGTGC；

c、PCR反應(yīng)程序

94?℃?3?min；20循環(huán)：94℃?30?s，67－58℃?30?s，每2個(gè)循環(huán)降1℃，72?℃?1?min；10循環(huán)：94℃?30?s，58℃?30?s，72?℃?1?min；72?℃?5?min；

d、擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)：

取10?μL?PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，在1%g/mL的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳，紫外光下檢測(cè)：存在長(zhǎng)度分別約為200?bp?和?150?bp??大小的兩條帶，說(shuō)明個(gè)體為抗性純合子；存在長(zhǎng)度分別約為200?bp?和80?bp?大小的兩條帶，說(shuō)明個(gè)體為敏感純合子；同時(shí)存在長(zhǎng)度分別約為200?bp?、150?bp和?80?bp大小的三條帶，說(shuō)明個(gè)體為雜合子。