[發明專利]一種含HIV-1 CRF01-AE亞型RT基因的雜交免疫缺陷質粒、病毒及應用

有效

• 申請號: 201110002816.4
• 申請日: 2011-01-07
• 公開（公告）號: CN102154356A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 秦川;魏強;王衛;叢喆;蔣虹;姚南
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學實驗動物研究所
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/52;C12N7/01;A01K67/027;C12R1/93
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;李玉秋

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種含HIV-1?CRF?01-AE亞型RT基因的雜交免疫缺陷質粒、病毒RT-SHIV/AE及其在構建AE亞型RT-SHIV猴模型中的應用。

背景技術

艾滋病，又稱為獲得性免疫缺陷綜合癥(Acquired?Immune?Deficiency?Syndrome，AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(Human?immunodeficiency?virus，HIV)引起的一類死亡率極高的傳染性疾病，對全球尤其是亞洲和非洲發展中國家的人民的生命健康安全威脅極大。目前流行于全球的HIV-1分為三組，M組、O組和N組，M組內又可分為A～J?10個亞型，各亞型間的基因離散率是20％～35％，同時，還有數十種循環重組型存在。HIV-1CRF?01-AE亞型病毒1989年最先在泰國發現，主要在性傳播人群中流行擴散，在吸毒人群中廣泛傳播，改變了以往B亞型感染為主的流行格局。近年來，CRF?01-AE亞型病毒日益泛濫，正在成為我國最流行的HIV-1病毒亞型。

高效抗逆轉錄病毒療法(Highly?Active?Anti-Retroviral?Therapy，HAART)的發明是艾滋病防治道路上的一個重大進步。大多數的患者經過HAART的治療能抑制HIV-1病毒的復制，使病毒的載量處于一個低水平狀態，這種療法的應用能降低死亡率和提高病人的生活質量。HAART中含有三類抗逆轉錄病毒的藥物，分別為：

(1)核苷酸近似體逆轉錄酶抑制劑(NRTIs)。NRTIs中含有缺少3-OH的核苷酸，通過這種缺少3-OH的核苷酸在逆轉錄的過程中與RT基因結合，從而阻斷DNA鏈的形成，使逆轉錄過程失敗。

(2)非核苷類逆轉錄酶抑制劑(NNRTIs)。NNRTIs是一種與逆?轉錄酶結合的非競爭性抑制劑，主要在化學合成方面發揮作用而阻斷DNA的合成。

(3)蛋白酶抑制劑(PIs)。PIs與病毒蛋白酶催化基因結合抑制酶活性，導致蛋白前體不能裂解和形成成熟病毒體。

早期的HAART方案包含一種蛋白酶抑制劑和兩種核苷酸近似體逆轉錄酶抑制劑。非核苷類逆轉錄酶抑制劑研制成功后，便廣泛的應用于HAART方案中。現今主流的逆轉錄療法主要包括兩種NRTIs和一種NNRTI或PI的組合。

HAART治療的過程中潛伏和殘余的病毒仍在持續復制，并未從體內剔除，并且長期的治療會導致HIV病毒的耐藥性突變，一旦產生突變將會導致病毒載量的反彈和治療的失敗，HIV病毒耐藥性突變是導致HARRT治療失敗的一個主要原因。為了更好的研究病毒的耐藥性突變以及對藥物的有效性進行合理評價，需要選用合適的動物模型進行研究。動物模型在研究HIV-1抗病毒耐藥性問題存在很多的優點，使用合適的動物模型可以研究病毒在人體內的復制情況，包括不同的細胞亞群對病毒感染的反應、免疫選擇壓力、不同位點的病毒復制特點等。

HIV與SIV同屬于逆轉錄病毒科慢病毒屬，且同屬于靈長類慢病毒組，關系最為密切。恒河猴感染猴免疫缺陷病毒SIV和人感染HIV-1存在著相似性，繼而發展出的癥狀也和AIDS相似，這些特點可以使SIV/恒河猴動物模型用于抗逆轉錄治療的研究。然而，恒河猴感染SIV作為一個治療性的動物模型還存在一些限制，SIV的RT和HIV-1的RT的相似性為60％，在對于藥物的易感性和非核苷逆轉錄酶抑制性上存在著差異，主要問題為HIV和SIV中的逆轉錄酶RT基因對藥物的敏感性不同。

國外科學家經過基因操作手段將人免疫缺陷病毒HIV的RT基因替換猴免疫缺陷病毒SIV的RT基因得到嵌合病毒RT-SHIV來解決這個問題，該嵌合病毒RT-SHIV包含有抗HIV病毒藥物的主要靶點-HIV?RT基因。由RT-SHIV建立的恒河猴動物模型能夠對抗逆轉錄?病毒藥物進行有效性的篩選，以及深入的研究和了解更多關于治療過程中病毒抗性，殘留病毒的持續復制等問題。

現有RT-SHIV病毒均攜帶HIV-1B亞型的RT基因，B亞型主要在歐美流行，這種RT-SHIV適合研究歐美艾滋病治療問題，而中國的HIV-1流行株主要為CRF-BC亞型，CRF-AE亞型和B’亞型，其中又有以CRF?01-AE亞型為主，HIV-1B亞型與CRF?01-AE亞型兩者RT基因的同源性只有90.36％，特別是有很多耐藥位點的差異，因此B亞型的RT-SHIV不適合針對中國患者的艾滋病藥物研究。