[發明專利]螺旋藻中β-胡蘿卜素的HPLC測定方法

無效

• 申請號: 201110001907.6
• 申請日: 2011-01-06
• 公開（公告）號: CN102175789A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發明（設計）人: 趙曉娟;李星芝;侯春蓮
• 申請（專利權）人: 天津天獅生物發展有限公司;天津天獅生命源有限公司;天獅集團有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/86;G01N30/02
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 宋潔瑾

1.一種螺旋藻中β-胡蘿卜素的HPLC測定方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)供試品溶液的制備：采用皂化提取法溶解螺旋藻中的β-胡蘿卜素，具體為：稱取螺旋藻樣品，加入乙醇溶液、抗壞血酸和氫氧化鉀溶液于恒溫水浴鍋中回流，所得溶液轉移至分液漏斗用沸程為30-60℃石油醚萃取皂化提取液中的β-胡蘿卜素，取上層石油醚層，用水洗滌3-5次，棄去水層，將石油醚層通過無水硫酸鈉進行干燥，然后轉移至容量瓶定容即得；

(2)標準曲線的制備：

A、標準儲備液：準確稱取β-胡蘿卜素標準品于容量瓶中，加氯仿溶解，用石油醚定容，配制成胡蘿卜素儲備液，于-18℃避光保存，臨用前標定；

標準溶液的標定：取標準儲備液，用正己烷定容，混勻，測定其吸光值，以正己烷為空白，入射光波長450nm，平行測定三份，取均值。按下列公式計算溶液濃度：

X=AE×100.05]]>

X：胡蘿卜標準溶液濃度，單位為微克每毫升

A：吸光值

E：β-胡蘿卜素在正己烷溶液中，入射光波長450nm，比色杯厚度1cm，溶液濃度為1ug/ml的吸光系數，為0.2368

測定過程中稀釋倍數的換算系數

B、取胡蘿卜素儲備液配制不同濃度的β-胡蘿卜素溶液，分別上HPLC測定，求得峰面積繪制標準曲線；

C、標準使用液：量取現標定的β-胡蘿卜素標準儲備液配制標準使用液；

(3)利用步驟(2)C中確定的標準使用液的濃度作為外標計算待測液中β-胡蘿卜素的含量：

X=c×Vm×10001000×10]]>

按照步驟(1)所述方法制備供試品待測液，

X--試樣中β-胡蘿卜素的含量，單位為毫克每百克(mg/100g)

C-試樣測定液中β-胡蘿卜素的濃度，單位為微克每毫升(ng/mL)

m-試樣質量或體積，單位為克或毫升(g或mL)。

2.根據權利要求1所述螺旋藻中β-胡蘿卜素的HPLC測定方法，其特征在于，所述步驟(1)螺旋藻樣品為0.1-1g，加入乙醇的體積為25-50ml，抗壞血酸濃度為5％-15％，體積為3-10ml，氫氧化鉀溶液濃度為40-60％，體積為8-15ml，所述的水浴溫度為80-100℃，所述的皂化時間為0.5-1.5h。

3.根據權利要求1所述螺旋藻中β-胡蘿卜素的HPLC測定方法，其特征在于，所述步驟(1)中石油醚萃取皂化提取液中的β-胡蘿卜素體積為40-70ml，震搖1-5min；所用水的體積為5ml，無水硫酸鈉6-10g。

4.根據權利要求1所述螺旋藻中β-胡蘿卜素的HPLC測定方法，其特征在于，所述步驟(1)HPLC色譜條件是：

流動相：甲醇85-95體積份

乙腈5-15體積份

流速為1.2mL/min；進樣量：10μL，柱溫：30℃。