[發(fā)明專利]癌癥診斷方法及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080070557.2
• 申請(qǐng)日: 2010-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN103384824A
• 公開（公告）日: 2013-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: F·巴斯蒂亞;D·奧托瑪利;A·迪里奧;M·T·洛泰利;M·巴洛尼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: THD股份公司
• 主分類號(hào): G01N33/50
• 分類號(hào): G01N33/50;G01N33/574
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 林遠(yuǎn)成

1.一種方法，其用于診斷癌癥或與其相關(guān)的殘余病癥，或者用于預(yù)后癌癥，或者用于監(jiān)測(cè)針對(duì)癌癥的抗腫瘤治療的有效性，或者用于對(duì)患有癌癥的個(gè)體進(jìn)行隨訪監(jiān)測(cè)，其包括：

(i)將分離的成體干細(xì)胞與分離的血衍生物樣品接觸；

(ii)驗(yàn)證所述干細(xì)胞中至少一種上皮標(biāo)志物的表達(dá)。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述癌癥選自：結(jié)腸直腸癌，胃癌，乳腺癌，肺癌，前列腺癌，肝癌，卵巢癌，腎癌，甲狀腺癌，膀胱癌或胰腺癌。

3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述分離的血衍生物樣品是血清或血漿。

4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法，其中所述干細(xì)胞是多能干細(xì)胞，并且優(yōu)選選自：間充質(zhì)干細(xì)胞，CD133⁺細(xì)胞，CD44⁺細(xì)胞，CD90⁺細(xì)胞，CD29⁺細(xì)胞，CD105⁺細(xì)胞，CD117⁺細(xì)胞，CD56⁺細(xì)胞和CD73⁺細(xì)胞。

5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述上皮標(biāo)志物為細(xì)胞角蛋白，優(yōu)選為CK-18，CK-19，CK-20或CK-21，更優(yōu)選為CK-19。

6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的方法，其中將干細(xì)胞與血衍生物樣品接觸的所述步驟(i)包括：將所述干細(xì)胞接種于支持物上的步驟和將所述樣品在用于干細(xì)胞的培養(yǎng)基中稀釋的步驟。

7.權(quán)利要求6的方法，其中血衍生物樣品在細(xì)胞培養(yǎng)基中的所述稀釋在1∶2至1∶20之間變化，優(yōu)選為1∶4至1∶8。

8.權(quán)利要求6或7中任一項(xiàng)的方法，其中所述的在培養(yǎng)基中稀釋的樣品被添加至所述干細(xì)胞。

9.權(quán)利要求8的方法，其中所述干細(xì)胞在稀釋于培養(yǎng)基的樣品中生長(zhǎng)一段時(shí)間，所述時(shí)間段在48到180小時(shí)之間變化，優(yōu)選90至150小時(shí)。

10.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述驗(yàn)證至少一種上皮標(biāo)志物的表達(dá)的步驟通過下列來進(jìn)行：免疫熒光法，免疫組織化學(xué)，ELI?SA或RT-PCR；優(yōu)選地，PCR是實(shí)時(shí)的。

11.權(quán)利要求10的方法，其中所述通過ELISA測(cè)定至少一種上皮標(biāo)志物的表達(dá)的步驟包括以下步驟：

●裂解已接觸血衍生物樣品的干細(xì)胞；

●將先前步驟中獲得的蛋白裂解物的等分試樣與抗上皮標(biāo)志物的至少一種抗體接觸，優(yōu)選地，所述抗體吸附在適當(dāng)?shù)闹С治锷希灰约?/p>

●測(cè)定至少一種上皮標(biāo)志物和所述抗體的結(jié)合。

12.權(quán)利要求10的方法，其中所述通過免疫熒光法測(cè)定至少一種上皮標(biāo)志物的表達(dá)的步驟包括以下步驟：

●將已接觸所述血衍生物樣品的干細(xì)胞固定于玻片上；

●將先前步驟中固定的細(xì)胞與抗上皮標(biāo)志物的至少一種抗體接觸；以及

●測(cè)定由分化的干細(xì)胞表達(dá)的至少一種上皮標(biāo)志物與所述抗體的結(jié)合。

13.權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)的方法，其中所述測(cè)定至少一種上皮標(biāo)志物的表達(dá)的步驟，在從細(xì)胞去除所述稀釋于培養(yǎng)基的血衍生物樣品后實(shí)現(xiàn)。

14.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的方法，其中監(jiān)測(cè)針對(duì)癌癥的抗腫瘤治療的有效性包括，比較患病個(gè)體在所述個(gè)體所接受的治療性治療的不同階段的分離的樣品中，至少一種上皮標(biāo)志物的表達(dá)水平。

15.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法的特征在于，其特異性為60％至100％，優(yōu)選70％至90％。

16.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法的特征在于，其靈敏度為60％至100％，優(yōu)選70％至90％。

17.用于實(shí)施權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的方法的試劑盒，其包括：

●抗上皮標(biāo)志物的至少一種抗體，其中所述抗體優(yōu)選地綴合有熒光染料或者酶，或者用于擴(kuò)增至少一種上皮型標(biāo)志物的至少一對(duì)寡核苷酸；和/或

●干細(xì)胞樣品；和/或

●用于培養(yǎng)所述干細(xì)胞的培養(yǎng)基。

18.權(quán)利要求17的試劑盒，其中所述抗體抗細(xì)胞角蛋白，優(yōu)選細(xì)胞角蛋白18，細(xì)胞角蛋白19，細(xì)胞角蛋白20或細(xì)胞角蛋白21，更優(yōu)選細(xì)胞角蛋白19。