[發明專利]通過用自體血清培養自體角質形成細胞和成纖維細胞來生產用于生成皮膚的自體皮膚片或敷料的方法

有效

• 申請號: 201080067724.8
• 申請日: 2010-05-21
• 公開（公告）號: CN103003415B
• 公開（公告）日: 2017-02-08
• 發明（設計）人: 胡安·卡洛斯·桑布拉諾比格爾;珍妮弗·克里斯蒂娜·高納席爾瓦
• 申請（專利權）人: 羅德里戈·福西翁·索托帕雷哈;胡安·卡洛斯·桑布拉諾比格爾;珍妮弗·克里斯蒂娜·高納席爾瓦
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 顧晉偉,全萬志

技術領域

本發明涉及用于形成皮膚敷料或片的方法，所述皮膚敷料或片用于對患者中的皮膚損失進行覆蓋、使其治愈、結斑、減輕。特別地，本發明涉及用于在實驗室中實施的生產皮膚的方法。

背景技術

目前，深度燒傷以及由不同創傷或疾病引起的其他皮膚組織損失造成皮膚損傷，這些損傷需要對這些區域進行護理覆蓋。已經用直接獲自患者自身皮膚的皮膚移植物實施這種覆蓋。該方法盡管有效，但在獲得所述移植物的區域(大腿、背部、臀部)中產生顯著的瘢痕(照片1)。此外，該方法必須在實施了全麻或局麻的外科手術中進行，這產生了任何外科手術所固有的并發癥，例如：嚴重的疼痛、感染、以及出血、新的手術、以及死亡(盡管百分率非常低)。此外，這還意味著較高的額外經濟花費，例如住院、為治愈而進行的會診、治療供體區域的瘢痕、用于手術的特殊材料以及將患者轉移到更綜合的醫院，等。

皮膚撕脫傷造成對皮膚上皮組織的損傷，導致細胞損失，其在體內條件中被用成纖維細胞(其充當飼養層(alimentadora))產生的纖維基質替換。有多個報道涉及角質形成細胞培養物用于構建皮膚再生片，所有這樣的報道都述及供體所提供的或來自尸體的細胞(異體的)，這意味著對供體和受體兩者實施多項研究，培養在胎牛血清中，這使得該產品昂貴且在發展中國家中不可行，因此，角質形成細胞培養物在患者自身的血清(自體的)中發育，在作為飼養層的同一患者的成纖維細胞(自體的)上，并且使用同一患者的角質形成細胞(自體的)，因此當覆蓋出血的區域時避免了免疫和排斥反應，因此提高了侵襲性過程中皮膚的生存力，并且通過該方法在非常短的時間內獲得了完全的上皮化(皮膚生長)，結果良好且成本很低。

因此，用于覆蓋受影響區域的替代機制一直是世界范圍內的研究目標。在該范圍內，用于生成皮膚的方法尤為突出，其允許替換損失的皮膚并且避免整個前述創傷。到目前為止，已使用來自尸體的細胞開發了此類方法，但該方法有一些缺陷，因為使用來自尸體的細胞在很多情況中產生免疫反應，這可產生組織排斥和令人不太滿意的結果。此外，這些方法的成本是非常高的，因為使用來自尸體的皮膚意味著實施多種免疫相容性檢查等，以排除接觸傳染病(例如HIV和肝炎)的可能性。

發明簡述

自2008年起，一組外科醫生和整形外科醫生開始了這樣的任務：尋找用于生成皮膚而又避免前述并發癥的方法。因此，他們決定研究這樣的方法：由受影響者的非常小份(3mm)的皮膚生成皮膚，因此確保了使用所培養組織的益處并且避免了不相容風險、高成本和額外疤痕的缺點。

我們由取自患者皮膚的細胞生成皮膚的方法的優點對于全世界的科學以及整形外科和醫學的未來具有非常重要的意義。其中，重要的是突出以下優點：

1.該方法不生成除皮膚損傷以外的額外疤痕，因為從患者中盡可能少地且從不可見的位置取出皮膚。

2.不引起患者的創傷，因此不產生疼痛。

3.不具有免疫排斥問題，因為所使用的組織取自同一患者。

4.不需要將該方法作為手術實施。

5.該方法可由任何專業的護士和醫生來操作。

6.治療患者的醫院不必要求用于取皮膚的特殊材料(稱為取皮機(Dermatome))及其切割儀器，因為僅可使用一次，所以它們成本不利。這些產品對于本發明的皮膚培養方法來說不是必須的。

7.生產成本比來自尸體的皮膚便宜約80％，并且美學結果要好得多。

8.生產和經銷成本比在20×20cm面積上外科操作的成本低50％。

經過基本的培訓之后，該方法在世界上任何地方(包括發展中國家)都是可重復的，因為所有所使用的材料是任何實驗室中常用且基本的那些。

下文中給出的簡要比較分析將顯示鑒于本發明的多個實施方案的現有技術。所述分析的目標是突出本發明的優點，其賦予用于獲得請求保護之專利主題的必要特征。

有充足的文獻說明現有技術，其中很詳細地描述了所使用的方法并且以所引用的文獻為基礎，可與實現上述公開結論的本發明進行詳細的比較。下文中將給出所述參考文獻，其可供參考。

自很久以前就開發了用于細胞培養物的不同方法，所述細胞培養物用作出血皮膚區域的覆蓋物和/或皮膚代用品。本發明產品的新穎性在于使用同一患者的血清(自體的)由自體細胞產生，在僅三天內獲得皮膚的層。在另一種方法中，我們發現：

1.人皮膚等同物

A.供體或尸體細胞培養物