[發(fā)明專利]抑制c-Met表達的siRNA及含有所述siRNA的抗癌組合物

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080065020.7
• 申請日: 2010-12-28
• 公開（公告）號: CN102782133A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 金善玉;金詳熹;趙恩娥;印昌勛
• 申請（專利權(quán)）人: 株式會社三養(yǎng)生物制藥
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/63;A61K31/7105;A61P35/00
• 代理公司: 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種小干擾RNA（siRNA），其可以互補結(jié)合到c-Met轉(zhuǎn)錄本（mRNA轉(zhuǎn)錄本）的堿基序列上，從而抑制c-Met的表達且不引起免疫反應(yīng)，本發(fā)明還涉及所述siRNA用于預(yù)防和/或治療癌癥的用途。

背景技術(shù)

c-Met是一種編碼被稱為肝細(xì)胞生長因子受體（HGFR）的蛋白的原癌基因。1984年，c-Met首次在化學(xué)致癌物處理的人骨肉瘤中被發(fā)現(xiàn)。1986年，由于與tpr（易位啟動子區(qū)）基因整合，c-Met被發(fā)現(xiàn)是潛在的原癌基因，（Cooper?et?al.,Nature,311,29-33,1984;Dean?et?al.,Mol?cell?Biol.,7,921-924,1987;Park?et?al.,Cell,45,895-904,1986）。

一旦和被稱為c-Met的細(xì)胞表面受體酪氨酸激酶（TK）結(jié)合，由間充質(zhì)細(xì)胞分泌的肝細(xì)胞生長因子（HGF）就會刺激細(xì)胞生長、細(xì)胞運動、胚胎發(fā)生、傷口愈合及血管生成。這些多能作用在發(fā)育、內(nèi)環(huán)境平衡和組織再生中起基礎(chǔ)性的重要作用。HGF信號傳遞還有助于幾種人癌癥中的癌發(fā)生和腫瘤發(fā)展，并且可促進腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的攻擊性細(xì)胞侵襲力。（Nakamura?et?al.,J?Clin?Invest.,106,1511-9,2000;Comoglio?et?al.,Semin?Cancer?Biol,11,153-65,2001;Boccaccio,Nat?Rev?Cancer,6,637-45,2006;Huh?CF?et?al.,Proc?Natl?Acad?Sci?USA,101,4477-82,2004）。

大多數(shù)的HGF/c-Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常來自于由HGF或c-Met過表達或突變導(dǎo)致的HGF或c-Met活性升高，并且已知這與多種癌癥患者的不利預(yù)后密切相關(guān)。

由于發(fā)現(xiàn)c-Met蛋白活性和癌癥發(fā)生率/轉(zhuǎn)移之間密切關(guān)系以及其他受體酪氨酸激酶抑制劑在臨床上成功，對靶向c-Met的抗癌藥物的開發(fā)有積極進展。但是，目前臨床階段的大多數(shù)候選藥物是基于蛋白質(zhì)或c-Met受體抗體的三級結(jié)構(gòu)設(shè)計的化學(xué)合成抑制劑，例如抑制c-Met信號途徑的酪氨酸激酶抑制劑。

雖然低分子量的激酶抑制劑與靶向大量蛋白激酶的激酶抑制劑相比具有提高的對c-Met的選擇性，但仍然顧慮由于脫靶至其他與c-Met結(jié)構(gòu)相似的蛋白質(zhì)而導(dǎo)致的副作用。

雖然相比之下抗體藥物有著極好的選擇性，但仍然存在由復(fù)雜生產(chǎn)過程導(dǎo)致的生產(chǎn)率問題和儲存過程中不穩(wěn)定問題。因此，一直需求開發(fā)靶向c-Met功能的有效抑制劑。

最近，人們發(fā)現(xiàn)核糖核酸介導(dǎo)的干擾（RNAi）可以通過引起甚至對現(xiàn)有技術(shù)來說還不是藥物靶點的序列特異性基因沉默來幫助開發(fā)首要候選藥物。因此，RNAi被認(rèn)為是一種能夠?qū)Π悬c有限和合成藥物非特異性問題提供解決方案且可以克服化學(xué)合成藥物局限的技術(shù)。因而，許多關(guān)于RNAi在開發(fā)現(xiàn)有技術(shù)很難治療的多種疾病尤其是癌癥的藥物中應(yīng)用的研究取得了積極的進展。

不過，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)siRNA（small?interfering?RNA）會引發(fā)固有的免疫反應(yīng)，并且還會超預(yù)計地更頻繁引起非特異性RNAi作用。

有報道顯示，在哺乳動物細(xì)胞中，長的雙鏈siRNA可以誘導(dǎo)有害的干擾素反應(yīng)；短的雙鏈siRNA也可以誘導(dǎo)對人身體或細(xì)胞有害的始初干擾素反應(yīng)；并且已經(jīng)知道，許多siRNA會引起比預(yù)計更高的非特異性RNAi作用（Kleirman?et?al.Nature,452:591-7,2008）。

雖然已經(jīng)嘗試開發(fā)靶向在癌癥發(fā)展中起重要作用的c-Met的siRNA抗癌藥物，但到目前為止尚未取得顯著成果。siRNA的個體序列的基因抑制效應(yīng)還未被提出，尤其是免疫活性還未被考慮。

雖然，siRNA由于其高活性、極好靶特異性等優(yōu)點而顯示出了作為新藥的巨大前景，但是對于治療性開發(fā)仍然有一些障礙需要克服，例如由于其可能被血液中的核酸酶降解而血穩(wěn)定性低、由于帶負(fù)電荷而穿過細(xì)胞膜的能力較弱、由于快速被排泄而在血液中的半存留期較短，從而其組織分布有限、并且可誘導(dǎo)能夠作用于其他基因調(diào)節(jié)途徑的脫靶效應(yīng)。