[發明專利]從大豆工藝流中分離的純化的庫尼茲胰蛋白酶抑制劑蛋白

無效

• 申請號: 201080064229.1
• 申請日: 2010-12-30
• 公開（公告）號: CN102770147A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: C.S.沙斯蒂恩;D.馬什;K.克勒;B.塔爾克;M.梅克爾;J.吳
• 申請（專利權）人: 索萊有限責任公司
• 主分類號: A61K36/00
• 分類號: A61K36/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;李炳愛

相關申請的交叉引用

本專利申請要求提交于2009年12月30日的美國臨時申請序列61/291,312的優先權，該臨時申請全文以引用方式并入本文。

發明領域

本公開提供了從大豆工藝流中分離和回收并具有至少約95重量％的總KTI蛋白濃度的新型庫尼茲(Kunitz)胰蛋白酶抑制劑(KTI)亞型。

發明背景

抑制蛋白分解酶類的蛋白經常以高濃度存在于很多種子和其它的植物貯藏器官中。抑制劑蛋白還存在于幾乎全部的動物組織和體液中。由于這些蛋白結合并抑制來自動物和微生物的蛋白分解酶類的能力，多年來它們已成為大量研究的對象。在醫學和生物學中，抑制劑已成為蛋白水解研究的有用工具。由于蛋白酶抑制劑在控制涉及一些疾病如胰腺炎、休克和肺氣腫的蛋白酶方面，以及作為用于調節哺乳動物受精作用的劑方面的治療潛力，它們是尤其受關注的。

包含顯著量的蛋白酶抑制劑的大豆工藝流。蛋白酶抑制劑已知至少抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶以及可能抑制調控一些關鍵代謝功能的多種其它關鍵跨膜蛋白酶。蛋白酶的局部給藥對于例如特應性皮炎的病癥是有用的，特應性皮炎是皮膚炎癥的一種普通形式，其可以局限于少數區塊或者涉及身體的大部分。蛋白酶抑制劑的褪色活性和它們防止紫外線導致的色素沉著的能力在體外和體內均已被證明(參見，例如，Paine等人，J.Invest.Dermatol.，116：587-595[2001])。蛋白酶抑制劑還被報道有利于創傷愈合。例如，分泌性白細胞蛋白酶抑制劑被證明當被局部施用時逆轉了組織的破壞并加速了創傷愈合過程。此外，絲氨酸蛋白酶抑制劑還能夠有助于在紅斑狼瘡病人中降低疼痛(參見，例如，美國專利6,537,968)。

天然存在的蛋白酶抑制劑可見于多種食物中，例如糧谷類(燕麥、大麥和玉米)、芽甘藍、洋蔥、甜菜根、小麥、龍爪稷和花生。所關注的一個來源是大豆。

從大豆和其它豆類中已鑒定了兩大類的蛋白酶抑制劑超家族，每一類具有多種同工抑制劑。庫尼茲胰蛋白酶抑制劑(KTI)是第一類的重要成員，第一類的成員具有大約170-200個氨基酸、介于20-25kDa之間的分子量，并且主要針對胰蛋白酶。庫尼茲胰蛋白酶抑制劑通常是具有以兩個二硫鍵連接的4個半胱氨酸、并且具有一個位于由二硫鍵限定的環中的反應性位點的單鏈多肽。第二類的抑制劑包含60-85個氨基酸，具有6-10kDa范圍的分子量，相對地熱穩定，并且在獨立的結合位點抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶。Bowman-Birk抑制劑(BBI)是這一類的一個實例。大豆中存在的蛋白酶抑制劑的平均水平，對于KTI和BBI最重要的蛋白酶抑制劑而言分別是約1.4％和0.6％。要注意的是，這些低水平使得分離天然的蛋白酶抑制劑用于臨床用途是不現實的。