[發明專利]對雙鏈DNA中的目標序列進行擴增的方法

無效

• 申請號: 201080062693.7
• 申請日: 2010-02-25
• 公開（公告）號: CN102741429A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 林美穗;夜久英信
• 申請（專利權）人: 松下電器產業株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/09
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 白麗;陳建全

1.一種對由第1單鏈DNA和第2單鏈DNA構成的雙鏈DNA中的雙鏈目標序列進行擴增的方法，其中，

所述雙鏈目標序列由單鏈目標序列和互補性單鏈目標序列構成，

所述第1單鏈DNA由3’末端-第1非擴增序列-所述單鏈目標序列-第2非擴增序列-5’末端構成，

所述第2單鏈DNA由5’末端-第3非擴增序列-所述互補性單鏈目標序列-第4非擴增序列-3’末端構成，

所述互補性單鏈目標序列、第3非擴增序列和第4非擴增序列分別與所述單鏈目標序列、所述第1非擴增序列和第2非擴增序列互補，

所述方法是將DNA聚合酶、脫氧核苷三磷酸、所述雙鏈DNA、正向引物、反向引物和第1阻礙核酸混合，使用聚合酶鏈反應對所述雙鏈目標序列進行擴增的工序A，

其中，所述正向引物和所述反向引物均作為用于利用所述DNA聚合酶的延伸反應的起點發揮作用，

所述正向引物與所述單鏈目標序列所含的3’末端側的序列的部分互補，

所述反向引物與所述互補性單鏈目標序列所含的3’末端側部分的序列互補，

所述第1阻礙核酸不會作為用于利用所述DNA聚合酶的延伸反應的起點發揮作用，

所述第1阻礙核酸與所述第3非擴增序列的一部分互補。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述第1阻礙核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氫、磷酸基、氨基、生物素基、巰基或它們的衍生物取代或修飾的DNA構成。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述第1阻礙核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氫、磷酸基、氨基、生物素基、巰基或它們的衍生物取代或修飾的鎖定核酸構成。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述第1阻礙核酸由肽核酸構成。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，在所述工序A中還混合第2阻礙核酸，所述第2阻礙核酸不作為用于利用所述DNA聚合酶的延伸反應的起點發揮作用，且與所述第2非擴增序列的一部分互補。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，所述第2阻礙核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氫、磷酸基、氨基、生物素基、巰基或它們的衍生物取代或修飾的DNA構成。

7.根據權利要求5所述的方法，其中，所述第2阻礙核酸由位于3’末端的核苷酸所含的糖的3位OH基被氫、磷酸基、氨基、生物素基、巰基或它們的衍生物取代或修飾的鎖定核酸構成。

8.根據權利要求5所述的方法，其中，所述第2阻礙核酸由肽核酸構成。