[發明專利]使用微生物生產天冬氨酸族氨基酸的方法

無效

• 申請號: 201080062068.2
• 申請日: 2010-06-15
• 公開（公告）號: CN102753692A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: C·維特曼;J·貝克爾
• 申請（專利權）人: 白光產業株式會社
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12P13/08;C12P13/20;C12N15/77;C12R1/15
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司 11012
• 代理人: 黃澤雄;楊敬

1.一種使用微生物生產天冬氨酸來源氨基酸、優選地賴氨酸的方法，與初始微生物相比，所述微生物包括至少以下特性：

(a)增加的葡萄糖6-磷酸脫氫酶活性；

(b)增加的果糖1，6-二磷酸酶活性；

(c)減弱的異檸檬酸脫氫酶活性；

(d)增加的二氨基庚二酸脫氫酶活性；以及

(e)增加的天冬氨酸激酶活性。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述微生物是重組微生物。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，

(a)增加的葡萄糖6-磷酸脫氫酶活性歸因于(i)zwf基因的過表達，優選地基于用異源啟動子取代zwf基因的天然啟動子和/或(ii)氨基酸殘基交換A243T，或(iii)用異源啟動子取代tkt操縱子的天然啟動子；

(b)增加的果糖1，6-二磷酸酶活性歸因于fbp基因的過表達，優選地基于用異源啟動子取代天然啟動子；

(c)減弱的異檸檬酸脫氫酶活性基于用不同的起始密碼子取代icd基因的天然起始密碼子；

(d)增加的二氨基庚二酸脫氫酶活性是基于ddh基因的過表達，優選地通過基因增加實現過表達；

(e)增加的天冬氨酸激酶活性是基于lysC基因的過表達，優選地通過導致氨基酸交換T311I的lysC基因的改造實現過表達。

4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，在特性(a)和/或(b)中的所述異源啟動子選自超氧化物歧化酶(sod)啟動子或伸長因子tu(eftu)啟動子。

5.根據任何一項前述權利要求所述的方法，其特征在于，所述重組微生物進一步包括至少一種以下改造：

(f)二氫吡啶二羧酸還原酶的過表達；

(g)二氨基庚二酸脫羧酶的過表達；

(h)丙酮酸羧化酶的過表達和突變；

(i)PEP羧化激酶的缺失；和

(j)高絲氨酸脫氫酶的突變。

6.根據任何一項前述權利要求所述的方法，其特征在于，所述微生物已經作為DSM23586保藏在DSMZ，或其衍生物。

7.根據任何一項前述權利要求所述的方法，其特征在于，所述重組微生物是改造的棒狀桿菌，優選地是改造的谷氨酸棒桿菌。

8.根據任何一項前述權利要求所述的方法，進一步包括收獲和純化天冬氨酸來源的氨基酸，優選地賴氨酸的步驟。

9.一種具有以下特性的重組微生物：

(a)增加的葡萄糖6-磷酸脫氫酶活性；

(b)增加的果糖1，6-二磷酸酶活性；

(c)減弱的異檸檬酸脫氫酶活性；

(d)增加的二氨基庚二酸脫氫酶活性；以及

(e)增加的天冬氨酸激酶活性。

10.根據權利要求9所述的重組微生物，其特征在于，

(a)增加的葡萄糖6-磷酸脫氫酶活性歸因于(i)zwf基因的過表達，優選地基于用異源啟動子取代zwf基因的天然啟動子和/或(ii)氨基酸殘基交換A243T，或(iii)用異源啟動子取代tkt操縱子的天然啟動子；

(b)增加的果糖1，6-二磷酸酶活性歸因于fbp基因的過表達，優選地基于用異源啟動子取代天然啟動子；

(c)減弱的異檸檬酸脫氫酶活性基于用不同的起始密碼子取代icd基因的天然起始密碼子；

(d)增加的二氨基庚二酸脫氫酶活性是基于ddh基因的過表達，優選地通過基因增加實現過表達；

(e)增加的天冬氨酸激酶活性是基于lysC基因的過表達，優選地通過導致氨基酸交換T311I的lysC基因的改造實現過表達。

11.根據權利要求9或10任何一項所述的微生物，其特征在于，所述異源啟動子選自超氧化物歧化酶(sod)啟動子或伸長因子tu(eftu)啟動子。

12.根據權利要求9-11任何一項所述的微生物，進一步包括至少一種以下改造：

(f)二氫吡啶二羧酸還原酶的過表達；

(g)二氨基庚二酸脫羧酶的過表達；

(h)丙酮酸羧化酶的過表達和突變；

(i)PEP羧化激酶的缺失；和

(j)高絲氨酸脫氫酶的突變。