[發明專利]生成哺乳動物樣復合N-聚糖的酵母菌株

無效

• 申請號: 201080061857.4
• 申請日: 2010-11-19
• 公開（公告）號: CN102834509A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: S.C.J.蓋森斯;W.弗維肯
• 申請（專利權）人: 奧克西雷恩英國有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12P21/00;C12N9/24;C12N15/81
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種生成能夠生成包含GlcNAcMan₅GlcNAc₂N-聚糖的蛋白質的真菌細胞的方法，所述方法包括：

a)提供遺傳工程化改造為生成包含Man₅GlcNAc₂N-聚糖的蛋白質的真菌細胞；

b)將編碼GlcNAc轉移酶I的核酸導入所述細胞中，其中所述核酸包含編碼將所述編碼的GlcNAc轉移酶I靶向至胞內區室的靶向序列的核苷酸序列，其中所述GlcNAc轉移酶I在所述真菌細胞中的表達生成包含GlcNAcMan₅GlcNAc₂N-聚糖的蛋白質。

2.權利要求1的方法，所述方法進一步包括將編碼靶蛋白的核酸導入所述細胞中，其中所述細胞生成修飾為包含所述GlcNAcMan₅GlcNAc₂N-聚糖的所述靶蛋白。

3.權利要求2的方法，其中所述靶蛋白結合Fc受體。

4.權利要求3的方法，其中所述靶蛋白是抗體或其片段。

5.權利要求2的方法，其中所述靶蛋白是治療性糖蛋白。

6.權利要求2的方法，其中所述靶蛋白是干擾素-β、GM-CSF、干擾素γ、或促紅細胞生成素。

7.權利要求1的方法，其中所述胞內區室是高爾基體。

8.權利要求1的方法，其中遺傳工程化改造為生成含有Man₅GlcNAc₂N-聚糖的蛋白質的所述真菌細胞是OCH1活性缺陷的，并且包括編碼α-1,2-甘露糖苷酶的核酸，其中編碼所述α-1,2-甘露糖苷酶的所述核酸包括編碼將所述編碼的α-1,2-甘露糖苷酶靶向至內質網的靶向序列的核苷酸序列。

9.權利要求8的方法，其中所述靶向序列是HDEL序列。

10.權利要求1的方法，其中所述真菌細胞是解脂耶氏酵母或陸地酵母。

11.權利要求1的方法，所述方法進一步包括將編碼甘露糖苷酶II的核酸導入所述細胞中，其中編碼所述甘露糖苷酶II的所述核酸包含編碼將所述編碼的甘露糖苷酶II靶向至高爾基體的靶向序列的核苷酸序列，其中所述甘露糖苷酶II在所述真菌細胞中的表達生成包含GlcNAcMan₃GlcNAc₂N-聚糖的蛋白質。

12.權利要求1或權利要求11的方法，所述方法進一步包括將編碼半乳糖基轉移酶的核酸導入所述細胞中，其中編碼所述半乳糖基轉移酶的所述核酸包含編碼將所述編碼的半乳糖基轉移酶靶向至高爾基體的靶向序列的核苷酸序列，其中所述半乳糖基轉移酶在所述真菌細胞中的表達生成包含GalGlcNAcMan₅GlcNAc₂或GalGlcNAcMan₃GlcNAc₂N-聚糖的蛋白質。

13.權利要求12的方法，所述方法進一步包括將編碼靶蛋白的核酸導入所述細胞中，其中所述細胞生成修飾為包含所述GalGlcNAcMan₅GlcNAc₂或GalGlcNAcMan₃GlcNAc₂N-聚糖的所述靶蛋白。

14.權利要求12的方法，其中所述半乳糖基轉移酶是UDP-Glc-4-差向異構酶和β-1,4-半乳糖基轉移酶I的催化域的融合物。

15.權利要求13的方法，進一步包括分離修飾為包含所述GalGlcNAcMan₅GlcNAc₂或GalGlcNAcMan₃GlcNAc₂N-聚糖的所述靶蛋白。