[發(fā)明專利]在植物中血管生成素的表達(dá)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080061639.0
• 申請(qǐng)日: 2010-11-18
• 公開（公告）號(hào): CN102753011B
• 公開（公告）日: 2017-12-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: G·斯潘根貝格;A·莫拉多夫;王江輝;B·G·科克斯;M·奈特;M·麥克多納
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 農(nóng)業(yè)維多利亞服務(wù)控股有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/05
• 分類號(hào): C12N15/05;A01H4/00;C07K4/10;A01H5/00
• 代理公司: 北京北翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11285
• 代理人: 張廣育,姜建成

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物生成的血管生成素、相關(guān)的植物細(xì)胞、植物愈傷組織、植物、種子和其他植物部分以及從中得到的產(chǎn)物，還涉及由植物生成的血管生成素的用途。

本發(fā)明也涉及血管生成素基因在植物中的表達(dá)，以及相關(guān)的核酸、構(gòu)建體和方法。

背景技術(shù)

由ANG基因編碼的血管生成素屬于核糖核酸酶(RNA酶)超家族中的一員。血管生成素(也稱為核糖核酸酶5)是一個(gè)14kDa、非糖基化分泌的核糖核酸酶多肽。血管生成素被認(rèn)為通過(guò)稱為血管生成的過(guò)程來(lái)調(diào)控新生血管的生成，并被認(rèn)為可以調(diào)節(jié)在蛋白中出現(xiàn)功能性突變——可導(dǎo)致神經(jīng)肌肉紊亂肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)——的神經(jīng)元的存活。

在血管生成期間，血管生成素蛋白結(jié)合到位于內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表面的受體上并進(jìn)行核轉(zhuǎn)位，使其刺激對(duì)于毛細(xì)血管生成的細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂所必需的核糖體RNA(rRNA)的生成。與鍛煉相關(guān)的血管生成導(dǎo)致毛細(xì)血管生長(zhǎng)，使得可以將更大量的營(yíng)養(yǎng)物和氧氣供應(yīng)到肌肉組織中。

在我們共同待決的申請(qǐng)PCT/AU2009/000603中，我們證明血管生成素可在體外提高肌細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，顯著減輕肌肉生長(zhǎng)抑制素對(duì)成肌細(xì)胞的強(qiáng)力抑制作用。血管生成素富含在與促進(jìn)哺乳期的哺乳動(dòng)物健康、成長(zhǎng)和發(fā)育有關(guān)的分泌物的初乳和牛奶中。當(dāng)加入到小鼠的飼料中時(shí)，在4星期的時(shí)間內(nèi)，從牛奶中純化的血管生成素可以將其運(yùn)動(dòng)肌肉的生長(zhǎng)提高50％。在我們共同待決的申請(qǐng)PCT/AU2009/000602中，我們證明血管生成素在口服施用時(shí)是生物可用的。

血管生成素也同樣被顯示具有多種其他活性。這些包括去除皮膚缺陷(如色斑)、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、保護(hù)多形核白細(xì)胞免受自發(fā)性退化，以及對(duì)系統(tǒng)性細(xì)菌和真菌病原體的抗微生物活性的能力。血管生成素同樣看起來(lái)對(duì)生長(zhǎng)因子，例如VEGF、EGF和FGF的有效活性是必需的。另外，血管生成素蛋白中的功能性突變會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)肌肉紊亂肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)。

血管生成素可以有多種應(yīng)用，包括在藥學(xué)、飲食食品添加劑和化妝品中的應(yīng)用。然而，血管生成素在這些應(yīng)用中的用途則要求通過(guò)適當(dāng)?shù)膩?lái)源在商業(yè)規(guī)模上有效地制備該蛋白的過(guò)程。

血管生成素可在牛奶中獲得，但牛奶作為血管生成素來(lái)源的用途并不受青睞，因?yàn)檠苌伤貎H以較低的水平存在于牛奶中。同樣地，在牛奶中存在某些蛋白，例如酪蛋白，以及牛奶乳清蛋白(例如免疫球蛋白、乳鐵傳遞蛋白和乳過(guò)氧化物酶)掩蓋了血管生成素，妨礙了其提純。

本說(shuō)明書對(duì)任何現(xiàn)有技術(shù)的引用不是，也不應(yīng)被認(rèn)為是對(duì)這樣一種情況的確認(rèn)或者任何形式的建議，即該現(xiàn)有技術(shù)構(gòu)成了澳大利亞或者其他任何地區(qū)的公共知識(shí)的一部分，或者該現(xiàn)有技術(shù)會(huì)有理由被本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為是確定、理解并認(rèn)為是相關(guān)的。

本發(fā)明的目的是克服，或者至少是減輕與現(xiàn)有技術(shù)相關(guān)的一種或多種困難或缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

在第一方面，本發(fā)明提供了包含血管生成素基因或者其功能活性片段或變型和/或血管生成素多肽的植物細(xì)胞、植物愈傷組織、植物、種子或其他植物部分。

在第二方面，本發(fā)明提供了使用包含血管生成素的植物細(xì)胞、植物愈傷組織、植物、種子或其他植物部分，例如作為原料或用于人類消費(fèi)的方法。

在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了植物生成的血管生成素。

在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了包含植物生成的血管生成素的飼料儲(chǔ)備、飼料添加劑或獸醫(yī)產(chǎn)品。

在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了包含植物生成的血管生成素的食物、飲料、食品添加劑、營(yíng)養(yǎng)品或藥物。

在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了用于生產(chǎn)表達(dá)血管生成素基因的轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞的方法。

在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了從轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞中分離血管生成素的方法。

在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了從轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞中再生轉(zhuǎn)化的植物愈傷組織、植物、種子或其他植物部分的方法。

在更進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了從轉(zhuǎn)化的植物愈傷組織、植物、種子或其他植物部分中分離血管生成素的方法。

在更進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了在植物中提高血管生成素表達(dá)、活性或分離的方法，所述方法包括與血管生成素活性的調(diào)節(jié)子或調(diào)控子共表達(dá)血管生成素。

在更進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了包含血管生成素基因的人工構(gòu)建體，所述構(gòu)建體使得所述血管生成素基因能夠在植物細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。

在更進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了包含血管生成素基因和編碼血管生成素活性的調(diào)節(jié)子或調(diào)控子的基因的人工構(gòu)建體或嵌合序列。