[發(fā)明專(zhuān)利]自由漂浮鏈：漿膜癌干細(xì)胞

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080060755.0
• 申請(qǐng)日: 2010-11-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102770530A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬爾科姆·A·S·穆?tīng)?/a>;塞爾韋爾·A·埃特姆
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 斯隆-凱特林癌癥研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0797
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0797;G01N33/15;C12N15/12;C12Q1/68
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 李丙林;張英

1.一種用于產(chǎn)生漿膜癌干細(xì)胞的方法，所述方法包括

(a)在產(chǎn)生腹膜內(nèi)(ip)腫瘤的條件下，用一定量的哺乳動(dòng)物漿膜上皮腫瘤細(xì)胞腹膜內(nèi)注射免疫減弱的、非人哺乳動(dòng)物；

(b)從攜帶ip腫瘤的非人哺乳動(dòng)物收獲腹水；

(c)將所述腹水分流成包含漿膜自由漂浮鏈和白細(xì)胞的第一流分以及包含漿膜球形體的第二流分；

(d)從所述第一流分中去除所述白細(xì)胞以獲得富含自由漂浮鏈的流分；

(e)在產(chǎn)生粘附間充質(zhì)細(xì)胞以及富集漿膜癌干細(xì)胞的漿膜自由漂浮鏈的懸浮液的條件下，培養(yǎng)所述富含自由漂浮鏈的流分一定時(shí)間。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括：

(f)收集所述漿膜自由漂浮鏈的懸浮液；

(g)分離所述漿膜自由漂浮鏈與可能已經(jīng)形成的任何漿膜球形體；

(h)在產(chǎn)生包含至少50-100%的漿膜癌干細(xì)胞的自由漂浮漿膜自由漂浮鏈的培養(yǎng)物的條件下，在懸浮液中連續(xù)傳代所述自由漂浮鏈一定時(shí)間。

3.一種用于產(chǎn)生漿膜癌干細(xì)胞的方法，所述方法包括

(a)在產(chǎn)生腹膜內(nèi)(ip)腫瘤的條件下，用一定量的哺乳動(dòng)物漿膜上皮腫瘤細(xì)胞腹膜內(nèi)注射免疫減弱的非人哺乳動(dòng)物；

(b)從攜帶ip腫瘤的非人哺乳動(dòng)物收獲腹水；

(c)將所述腹水分流成包含漿膜自由漂浮鏈和白細(xì)胞的第一腹水流分以及包含漿膜球形體的第二腹水流分；

(d)在產(chǎn)生粘附間充質(zhì)細(xì)胞以及自由漂浮的自由漂浮鏈和腫瘤球形體的懸浮培養(yǎng)物的條件下，培養(yǎng)所述第二流分一定時(shí)間；以及

(e)將所述懸浮培養(yǎng)物分流成包含富集漿膜癌干細(xì)胞的自由漂浮的自由漂浮鏈的第一培養(yǎng)流分以及包含富集漿膜癌干細(xì)胞的自由漂浮腫瘤球形體的第二培養(yǎng)流分。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括

(f)在產(chǎn)生自由漂浮鏈和腫瘤球形體的另外的懸浮培養(yǎng)物的條件下，培養(yǎng)所述第二培養(yǎng)流分一定時(shí)間；

(g)將所述另外的懸浮培養(yǎng)物分流成自由漂浮鏈流分和腫瘤球形體流分；

(h)在產(chǎn)生包含至少10-30%漿膜癌干細(xì)胞的自由漂浮腫瘤球形體的懸浮培養(yǎng)物的條件下，使用所述自由漂浮腫瘤球形體流分重復(fù)步驟(f)和(g)一定時(shí)間。

5.一種用于分離漿膜自由漂浮鏈的方法，所述方法包括

(a)在產(chǎn)生腹膜內(nèi)(ip)腫瘤的條件下，用一定量的哺乳動(dòng)物漿膜上皮腫瘤細(xì)胞腹膜內(nèi)注射免疫減弱的非人哺乳動(dòng)物；

(b)從攜帶ip腫瘤的非人哺乳動(dòng)物收獲腹水；

(c)將所述腹水分流成包含漿膜自由漂浮鏈和白細(xì)胞的第一流分以及包含漿膜球形體的第二流分；以及

(d)從所述第一流分中去除所述白細(xì)胞以獲得富含自由漂浮鏈的流分。

6.一種用來(lái)分離漿膜球形體的方法，所述方法包括

(a)在產(chǎn)生腹膜內(nèi)(ip)腫瘤的條件下，用一定量的哺乳動(dòng)物漿膜上皮腫瘤細(xì)胞腹膜內(nèi)注射免疫減弱的非人哺乳動(dòng)物；

(b)從攜帶ip腫瘤的非人哺乳動(dòng)物收獲腹水；

(c)將所述腹水分流成包含漿膜自由漂浮鏈和白細(xì)胞的第一流分以及包含漿膜球形體的第二流分；以及

(d)分離所述漿膜球形體。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法進(jìn)一步包括在注射所述細(xì)胞一段足以產(chǎn)生ip腫瘤的時(shí)間以前、同時(shí)或以后，誘導(dǎo)腹膜內(nèi)炎癥。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述非人哺乳動(dòng)物是缺乏T細(xì)胞、B細(xì)胞和/或天然殺傷細(xì)胞的小鼠。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述小鼠是NOD/SCID小鼠、NSG小鼠或NOG小鼠。

10.根據(jù)權(quán)利要求1、3、5或6中任一項(xiàng)所述的方法，其中，分流包括通過(guò)30-60μm過(guò)濾器過(guò)濾所述腹水以獲得包含所述漿膜自由漂浮鏈和白細(xì)胞的流過(guò)流分以及包含漿膜球形體的保留流分。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中，漿膜是卵巢的。

12.分離的克隆純漿膜癌干細(xì)胞。