[發明專利]分泌異源多肽的方法和組合物

有效

• 申請號: 201080060730.0
• 申請日: 2010-11-05
• 公開（公告）號: CN102933600A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: M·馬里基;D·E·萊利
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C12N15/70;C12N15/67
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

1.制備抗體的方法，所述方法包括培養包含多核苷酸的宿主細胞，所述多核苷酸包括：(1)與編碼抗體重鏈的多核苷酸有效連接的第一翻譯起始區(TIR)，其中該TIR包含共翻譯原核分泌信號序列；和(2)與編碼抗體輕鏈的多核苷酸有效連接的第二TIR，其中該第二TIR包含共翻譯或翻譯后原核分泌信號序列，由此抗體在宿主細胞中表達后，重鏈和輕鏈折疊和組裝形成具生物學活性的抗體。?

2.權利要求1的方法，其中第一TIR包含STII或DsbA變體信號序列。?

3.權利要求2的方法，其中第一翻譯起始區包含DsbA變體信號序列。?

4.權利要求2的方法，其中第一翻譯起始區包含SEQ?ID?NOs:1-10、36-39、41和42之一的序列。?

5.權利要求1-4之任一的方法，其中第二翻譯起始區包含STII、DsbA、MalE或PhoA變體信號序列。?

6.權利要求5的方法，其中第二翻譯起始區包含編碼PhoA或MalE變體信號序列的多核苷酸。?

7.權利要求5的方法，其中第二翻譯起始區包含SEQ?ID?NOs.1-14、16-24、26-39和41-42之一的序列。?

8.權利要求1-7之任一的方法，其中宿主細胞還包含(3)與編碼Fc多肽的多核苷酸有效連接的第三翻譯起始區。?

9.權利要求8的方法，其中第三翻譯起始區包含STII、PhoI或DsbA變體信號序列。?

10.權利要求8的方法，其中第三翻譯起始區包含PhoI或DsbA變體信號序列。?

11.權利要求8的方法，其中第三翻譯起始區包含SEQ?ID?NOs:?23、24、26-39、41和42之一的序列。?

12.權利要求1-11之任一的方法，其中第一和第二翻譯起始區提供大約相等的翻譯強度。?

13.權利要求12的方法，其中相對翻譯強度為大約1或2。?

14.權利要求8-10之任一的方法，其中第一、第二和第三翻譯起始區提供大約相等的翻譯強度。?

15.權利要求14的方法，其中相對翻譯強度為大約1或2。?

16.權利要求1-15之任一的方法，其中在宿主細胞中該多核苷酸還包含啟動子。?

17.權利要求16的方法，其中啟動子是原核啟動子，其選自phoA、tac、lpp、lac-lpp、lac、ara和T7啟動子。?

18.權利要求1-17之任一的方法，其中宿主細胞是原核細胞。?

19.權利要求18的方法，其中原核細胞是大腸桿菌。?

20.權利要求19的方法，其中大腸桿菌是內源蛋白酶活性缺陷型菌株。?

21.權利要求19或20的方法，其中大腸桿菌的基因型缺失degP和prc基因，并攜帶突變的spr基因。?

22.權利要求1-21之任一的方法，其中宿主細胞還包含編碼至少一個原核多肽的多核苷酸，所述原核多肽選自DsbA、DsbC、DsbG和FkpA。?

23.權利要求22的方法，其中多核苷酸編碼DsbA和DsbC。?

24.權利要求1-23之任一的方法，其中宿主細胞包含共同編碼抗體的一個或多個多核苷酸。?

25.權利要求1-24之任一的方法，其中方法還包括從宿主細胞培養物中回收抗體。?

26.權利要求25的方法，其中從宿主細胞培養基中回收抗體。?

27.權利要求25或26的方法，其中方法還包括將所回收的抗體與藥學可接受的載體、賦形劑或載體組合，以制備包含抗體的藥物制劑。?

28.權利要求25或26的方法，其中所形成的免疫球蛋白多肽復合物的至少50%為抗體。?

29.權利要求28的方法，其中所形成的免疫球蛋白多肽復合物的至少70%為抗體。?